Hakai将m6A RNA甲基化与结直肠癌的免疫调节联系起来

《Cellular Oncology》：Hakai links m6A RNA methylation to immune regulation in colorectal cancer

　　

摘要

目的

旨在界定 Hakai 在结直肠癌（CRC）m⁶A 甲基转移酶复合体中的功能作用，并确定其调节如何影响 RNA 甲基化动力学及肿瘤 - 免疫相互作用。

方法

在 CRC 细胞模型中敲低 Hakai，随后进行 RNA 测序以评估转录组变化，并进行 MeRIP-seq 以评估 m⁶A 甲基化模式。使用 Western 印迹、流式细胞术、ELISA 和 RT-qPCR 验证蛋白表达及免疫相关标记物。通过免疫共沉淀分析蛋白 - 蛋白相互作用，并通过细胞分级分离评估亚细胞定位。通过将健康供者的外周血单个核细胞和 CRC 患者的固有层单个核细胞暴露于 Hakai 敲低细胞的条件培养基中，进行功能性免疫测定。

结果

尽管全局转录组变化微小，Hakai 敲低仍在 2D 和 3D CRC 模型中诱导了表型改变。值得注意的是，观察到 m⁶A 甲基化发生显著改变，特别是在包括细胞因子 TNF、IFNB1、CXCL1 和 CXCL8 在内的免疫相关转录本中，伴随 m⁶A 水平的整体降低。机制上，Hakai 与甲基转移酶复合体关联蛋白 VIRMA 相互作用并调节 METTL3 的亚细胞定位。功能上，Hakai 敲低细胞的条件培养基改变了患者来源免疫细胞中的免疫标记物表达，表明调节了肿瘤 - 免疫串扰。

结论

Hakai 在 CRC 中充当 m?A 甲基转移酶复合体的调节组分，影响 RNA 甲基化和免疫相关基因表达。我们的研究结果支持 Hakai 在肿瘤 - 免疫串扰中此前未被认识的作用，并表明其在调节 CRC 肿瘤微环境中的潜在相关性。