《International Journal of Neonatal Screening》：Classical Homocystinuria Incidentally Diagnosed Following a Normal Newborn Screening Result
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由胱硫醚β-合成酶（CBS）缺乏所致的经典同型半胱氨酸尿症（HCY）已被纳入多项新生儿筛查计划，传统筛查以干血片（DBS）甲硫氨酸作为首要生物标志物。然而部分患者在新生儿期甲硫氨酸水平正常或仅轻度升高，导致假阴性结果。研究人员报道一例4月龄男婴因矢状缝颅缝早闭
由胱硫醚β-合成酶（CBS）缺乏所致的经典同型半胱氨酸尿症（HCY）已被纳入多项新生儿筛查计划，传统筛查以干血片（DBS）甲硫氨酸作为首要生物标志物。然而部分患者在新生儿期甲硫氨酸水平正常或仅轻度升高，导致假阴性结果。研究人员报道一例4月龄男婴因矢状缝颅缝早闭转诊，代谢评估显示血浆甲硫氨酸与总同型半胱氨酸（tHcy）浓度显著升高。基因分析检出CBS基因纯合致病性变异c.1007G>A，确诊HCY。回顾性核查发现DBS样本于生后48小时采集，甲硫氨酸处于参考区间内，筛查算法未触发二阶tHcy检测。对原始DBS样本行Sanger测序证实同一纯合CBS变异，排除样本混淆，判定为真性假阴性。予吡哆醇与叶酸治疗后生化指标迅速归一，符合吡哆醇反应表型。本例说明新生儿期甲硫氨酸正常不能排除CBS缺乏，基因组学新生儿筛查策略或可更可靠检出该病。
研究背景与立项依据
经典同型半胱氨酸尿症（HCY，OMIM 236200）由位于21q22.3的胱硫醚β-合成酶（CBS）基因致病性变异引起，属转硫化通路障碍，以总同型半胱氨酸（tHcy）升高及继发性甲硫氨酸升高为特征，部分病例呈维生素B6（吡哆醇）反应性。未经治疗的CBS缺乏可导致晶状体脱位、智力障碍、骨质疏松、类马方体态及血栓并发症。现行新生儿筛查（NBS）多以DBS甲硫氨酸为一阶标志，但吡哆醇反应型轻症者在新生儿期甲硫氨酸可正常或仅轻度升高，造成漏筛。美国RUSP自2009年纳入该病，欧洲仅19国常规开展，西班牙2022年纳入国家面板。本研究由《International Journal of Neonatal Screening》刊发，旨在以真实假阴性个案揭示现行生化筛查局限，探讨二阶tHcy与基因组学NBS的补充价值。
主要技术方法
研究人员采用回溯性临床遗传学研究设计，样本来源于一例摩洛哥裔、父母近亲婚配（表兄妹）的3月龄男婴转诊队列；关键技术包括DBS氨基酸与酰基肉碱质谱分析、血浆甲硫氨酸与tHcy定量、全外显子测序（WES）、针对原始DBS提取DNA的Sanger测序验证、CT三维重建与脑MRI形态学评估，以及吡哆醇（100 mg/d）联合叶酸（10 mg/d）治疗前后生化动态随访，所有方法均依原文操作路径实施。
研究结果
引言部分阐明CBS缺乏的生化分流通路及吡哆醇反应分型，指出轻症型残酶活性较高、起病晚、预后佳，而NBS假阴性集中于该亚型。
病例呈现部分描述男婴因疑似矢状缝颅缝早闭（舟状头）就诊，出生史无异常，2月龄起头围跨过P99；CT三维重建确认矢状缝闭合伴骨嵴，MRI示脑干背侧束弥散受限、丘脑偏小、苍白球T2高信号。代谢筛查见血浆甲硫氨酸与tHcy显著升高；回溯NBS记录显示生后48 h DBS甲硫氨酸15.7 μmol/L（参考6–33）、Met/Phe 0.4，未触发二阶tHcy。WES检出CBS c.1007G>A（p.Arg336His）纯合变异，父母均为杂合，ClinVar ID 371147致病；原DBS DNA Sanger测序复现同变异，排除调换，定为NBS真性假阴性。启动吡哆醇+叶酸后1周甲硫氨酸降至38 μmol/L、tHcy 10.4 μmol/L，2月后甲硫氨酸36 μmol/L、tHcy 6.3 μmol/L，MRI脑干弥散受限消退，颅缝矫正术顺利，眼科未见晶状体脱位。
讨论部分指出以甲硫氨酸为一阶标志对吡哆醇反应型敏感度低；降切值损特异度，Met/Phe比与CLIR多变量工具有限增效；二阶tHcy依赖一阶异常故仍漏诊本例；DBS运输中甲硫氨酸降解理论存在但本例降幅需>50%方越界，可能性低；部分程序设1–2周二阶DBS有助但因低患病率致成本效益差；二阶tHcy在欧洲仅9/24实验室开展，因需还原二硫键及LC-MS/MS专长；卡塔尔将tHcy作一阶在高患病群有效，流注MS/MS（FIA-MS/MS）衍生化可促高通量整合；假阴性亦见于非反应型（早采、低蛋白、母乳）；本中心13年内NBS仅捕2例反应型、4例非反应型，另3例北非裔临床因晶状体脱位确诊者携同变异，印证轻表型漏筛。基因组NBS（WES/WGS）在美欧亚澳试点，CBS列入25/27基因包，可补生化盲区但受基因列表、变异注释、VUS处理、成本与周转限制，应定位互补而非替代。
结论部分翻译：本例提示新生儿期甲硫氨酸正常不能排除吡哆醇反应型CBS缺乏，虽不能完全排除DBS运输前分析甲硫氨酸降解的部分贡献。仅当甲硫氨酸或Met/Phe升高才触发tHcy的筛查算法可能遗漏临床相关病例。即便采用校正甲硫氨酸切值、Met/Phe比、CLIR工具及二阶tHcy，轻表型者仍可出现假阴性。整合生化与遗传或基因组学路径可提供更全面策略，减少漏诊、促成更早治疗并改善HCY长期预后。
重要意义
该研究以严谨的样本溯源（原DBS Sanger复核）锁定真性假阴性，量化了“正常甲硫氨酸≠排除CBS缺乏”的筛查逻辑漏洞，并为二阶tHcy触发条件、晚期复采DBS、群体特异性CBS基因面板及基因组NBS互补架构提供了循证节点，直接服务于《International Journal of Neonatal Screening》读者群的面板优化决策。
