FAβ-gal：一种基于荧光的衰老相关β-半乳糖苷酶X-gal检测法的自动化定量方法

《npj Aging》：FAβ-gal: an automated fluorescence-based quantification of the senescence-associated beta-galactosidase X-gal assay

　　

摘要

细胞衰老在衰老和癌症这两大当今生物医学和社会经济挑战中发挥着关键作用。因此，对细胞衰老的研究对于基于其调控来设计干预手段至关重要。在这方面，研究人员开发了多种技术来检测和量化细胞衰老。其中，最受欢迎的是基于使用显色底物X-gal的原始衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）比色测定法。该化合物可被β-半乳糖苷酶裂解，产生不溶性的蓝色沉淀物5,5'-二溴-4,4'-二氯靛蓝（通常称为靛蓝）。尽管该方法仍然是衰老检测的金标准，但由于其基于颜色的读数，其定量仍然具有挑战性。在本研究中，我们描述了一种名为FAβ-gal（β-半乳糖苷酶荧光分析）的方法，该方法利用了β-半乳糖产物靛蓝的远红外荧光特性，并使用原始的X-gal测定法，在常规广角荧光显微镜下实现了SA-β-gal活性的定量。此外，我们开发了工作流程和软件应用程序，以半自动且无偏的方式对SA-β-gal进行标准化定量。我们证明FAβ-gal测量值与衰老细胞百分比之间存在强线性相关性，并显示出高敏感性。此外，我们表明该方法也适用于组织切片，凸显了我们方法的 versatility。因此，FAβ-gal可以轻松引入已使用原始比色测定法的实验室日常工作中，从而提高衰老检测的准确性、敏感性和可重复性。