《Veterinary Microbiology》：Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus nsp10 Antagonizes IFN-λ1 Production via Synergizing with hnRNPU and Blocking IRF1 Nuclear Translocation
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•鉴定SADS-CoV nsp10为一种新型III型干扰素拮抗剂，能以剂量依赖方式抑制poly(I:C)诱导的IFN-λ1产生。•证实nsp10的IFN-λ1拮抗活性完全独立于其两个高度保守的锌指结构域。•揭示nsp10通过阻断IRF1的核转位间接抑制IFN-λ1的转录激活。
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鉴定SADS-CoV nsp10为一种新型III型干扰素拮抗剂，能以剂量依赖方式抑制poly(I:C)诱导的IFN-λ1产生。
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证实nsp10的IFN-λ1拮抗活性完全独立于其两个高度保守的锌指结构域。
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揭示nsp10通过阻断IRF1的核转位间接抑制IFN-λ1的转录激活。
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鉴定hnRNPU为nsp10的特异性宿主结合伴侣，两者协同增强对IFN-λ1产生的抑制作用并促进SADS-CoV复制。
引言
猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV），又称猪肠道α冠状病毒（PEAV）或猪肠道α冠状病毒（SeA-CoV），于2017年首次在中国广东省清远市被发现，导致新生仔猪暴发致死性腹泻（Gong等，2017）。SADS-CoV感染的临床表现，包括严重呕吐和水样腹泻，与其他猪肠道冠状病毒如猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）所引起的症状难以区分（Gong等，2017；Wang等，2019；Jung等，2020）。回顾性研究已记录SADS-CoV自2016年起在中国南方持续循环，截至2021年在广东、福建和广西等地反复暴发，给养猪业造成巨大经济损失（Li, Li等2018；Zhou等，2018；Xu等，2019；Zhou等，2019a；Zhou等，2019b；Zhou等，2019a；Zhou等，2019b；Sun等，2022）。
SADS-CoV是一种有包膜的单股正义RNA病毒，其基因组编码16种非结构蛋白（nsps）、4种结构蛋白和3种辅助蛋白（Ziebuhr，2005；Yang等，2020）。作为抵御病毒感染的第一道防线，宿主固有免疫系统通过模式识别受体（PRRs）识别病原体相关分子模式（PAMPs），触发信号级联反应以激活干扰素（IFN）的产生（Koyama等，2008；Duggal和Emerman，2012）。分泌的IFNs随后通过JAK-STAT通路诱导数百种IFN刺激基因（ISGs）的表达，在感染细胞及邻近细胞中建立抗病毒状态（Schoggins和Rice，2011；Kotenko和Durbin，2017）。为对抗宿主免疫，冠状病毒已进化出多种策略以逃逸IFN介导的抗病毒反应。我们此前的研究表明，SADS-CoV的多种非结构蛋白，包括nsp1、nsp5、nsp10、nsp12和nsp16，可显著抑制poly(I:C)诱导的IFN-λ1启动子活性。在机制上，nsp1通过介导干扰素调节因子1（IRF1）的蛋白酶体降解来消除IFN-λ1的转录激活（Zhong等，2024），而nsp5则直接与IκB激酶ε（IKKε）相互作用，阻断RIG-I样受体（RLR）信号级联的传递，最终抑制干扰素的合成（She等，2025）。然而，SADS-CoV nsp10拮抗IFN-λ1反应的分子机制仍知之甚少。
Nsp10是一种保守的冠状病毒蛋白，含有两个锌指结构域。在SARS-CoV中，nsp10作为nsp14（外切核糖核苷酸酶）和nsp16（2'-O-甲基转移酶）的关键辅助因子，形成对病毒复制和转录至关重要的功能复合物（Minskaia等，2006；Decroly等，2008；Ma等，2015）。在PDCoV中，nsp10已被证明可独立地通过阻断IRF3和NF-κB的激活来抑制IFN-β的产生，且该活性与其锌指结构域无关（Subissi等，2014；Fang等，2021）。SADS-CoV nsp10是否具有类似的IFN拮抗活性，以及是否靶向IFN-λ1反应，目前尚不清楚。本研究旨在探究SADS-CoV nsp10在调控IFN-λ1产生中的作用，并阐明其潜在的作用机制。
章节摘要
病毒、细胞与试剂
SADS-CoV毒株GDS04于2017年从广东省一只病猪中分离，并在Vero E6细胞中按此前描述的方法进行传代培养（She, Zhong等2025）。猪小肠上皮细胞系IPI-FX由华中农业大学（中国武汉）肖绍宝教授惠赠。非洲绿猴肾细胞系Vero E6购自美国典型培养物保藏中心（ATCC CCL-81）。两种细胞系均在改良版Dulbecco's Eagle培养基中进行培养。
SADS-CoV nsp10抑制RLR介导的IFN-λ1产生
为确认SADS-CoV nsp10的IFN拮抗活性，我们首先进行了双荧光素酶报告基因检测，考察其对poly(I:C)诱导的IFN-λ1启动子活性的影响。如图1A所示，与空载体对照组相比，nsp10的过表达显著抑制了poly(I:C)触发的IFN-λ1启动子活性。为进一步验证这一发现，我们将IPI-FX细胞转染不同剂量的pEGFP-N1-nsp10（0、0.25、0.5、0.75 μg），并通过
讨论
宿主固有免疫反应是抵御病毒入侵的第一道防线，其中干扰素（IFN）介导的信号通路构成了抗病毒免疫的核心。在冠状病毒发病机制的研究中，病毒蛋白抑制I型IFN产生的机制已被广泛报道，而对III型IFN的研究则相对有限。然而，IFN-λ对多种病毒具有强效的广谱抗病毒活性。不断
结论
综上所述，本研究证明SADS-CoV nsp10通过与hnRNPU协同作用，阻断IRF1的核转位，从而拮抗IFN-λ1的产生。该活性独立于nsp10的锌指结构域。我们的发现揭示了SADS-CoV所采用的一种新型免疫逃逸机制，并将hnRNPU确定为控制冠状病毒感染的潜在治疗靶点。仍需进一步研究以阐明其详细的分子机制，并评估靶向的
基金资助
本研究由国家自然科学基金（32273020）和河南省重点研发项目（241111112200）资助。
CRediT作者贡献声明
刘佳鑫：撰写——审阅与编辑，形式分析。李晶敏：撰写——审阅与编辑，方法论，形式分析。赵宇昆：撰写——审阅与编辑，撰写——初稿，方法论，调查，数据整理。魏晓娜：撰写——审阅与编辑，撰写——初稿，可视化，监督，项目管理，形式分析，数据整理。薛春懿：撰写——审阅与编辑，监督，资金获取，概念构思。曹永昌：
生成式AI及AI辅助技术在写作过程中的声明
在本文准备过程中，作者未使用任何AI或AI辅助技术。
利益冲突声明
作者声明不存在任何已知的竞争性经济利益或个人关系可能影响本文所报告的工作。
魏晓娜|赵宇昆|李晶敏|刘佳鑫|钟会奎|赵可宇|曹永昌|薛春懿
