《Zoonoses and Public Health》：Evidence of West Nile Virus Infections in Wild Boars (Sus scrofa) in the Netherlands, 2018–2021
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引言：正黄病毒（Orthoflaviviruses）正在欧洲出现，对动物和公共卫生具有潜在重大影响。乌苏图病毒（USUV）和西尼罗病毒（WNV）分别于2016年和2020年在荷兰首次检出。野猪（Sus scrofa）被认为是检测正黄病毒传播的有趣群体。研究人员
引言：正黄病毒（Orthoflaviviruses）正在欧洲出现，对动物和公共卫生具有潜在重大影响。乌苏图病毒（USUV）和西尼罗病毒（WNV）分别于2016年和2020年在荷兰首次检出。野猪（Sus scrofa）被认为是检测正黄病毒传播的有趣群体。研究人员旨在提供荷兰野猪中USUV和WNV感染的流行病学见解，并进一步探讨在考虑交叉反应模式情况下对血清学结果的解释。
方法：对2018年至2021年采集的共1504份野猪血清采用筛查ELISA进行检测。阳性样本通过病毒中和试验（VNT）进行确认。研究人员使用三级贝叶斯分层模型解释个体观察到的血清学结果。
结果：研究人员发现了整个研究期间野猪中存在WNV感染的证据，既往感染概率从2020年的7.82%到2019年的13.02%不等。研究结果显示，在四年研究期间，USUV既往感染呈下降趋势，从2018年的24.00%降至2021年的5.37%。此外，研究人员估计了针对两种病毒的直接和交叉反应滴度反应，包括发生交叉反应的概率。
结论：本研究表明，野猪中的WNV感染发生在2020年检测到首批人类病例之前。对野猪中的正黄病毒进行监测可为监测WNV和USUV等蚊媒病毒提供便捷方法。
欧洲地区正黄病毒（Orthoflavivirus，黄病毒科（Flaviviridae）中的一属病毒）的流行呈上升趋势，对动物和公共卫生构成潜在威胁。乌苏图病毒（Usutu virus, USUV）和西尼罗病毒（West Nile virus, WNV）分别于2016年和2020年在荷兰首次发现。这些病毒主要由库蚊（Culex spp.）传播，在鸟类与蚊虫之间维持地方性动物传播循环。人类感染通常无症状或症状轻微，但WNV可导致少数感染者出现严重疾病甚至死亡。由于终末宿主（如野猪）的病毒血症持续时间短暂，直接病毒检测常常失败，因此血清学检测成为追忆既往感染的主要手段。然而，WNV与USUV同属日本脑炎血清复合群，抗原交叉反应严重干扰血清学结果解释。此外，个体抗体应答差异、抗体随时间消退、共感染与再感染等因素进一步增加了判读难度。传统的四倍滴度差异判定标准可能无法区分单病毒感染与交叉反应，导致感染概率估计偏差。为解决这些问题，研究人员将统计建模方法引入血清学数据分析，以期在考虑交叉反应和检测误差的前提下，更准确地估计病原体传播动态。
该研究由荷兰瓦赫宁根生物兽医研究等机构的研究人员实施，基于2018–2021年荷兰全国野猪监测计划收集的血清样本，系统评估了USUV和WNV在野猪种群中的感染情况。研究结果表明，WNV在2020年荷兰首次报告人类病例之前已在野猪中流行，这一发现对理解病毒的早期传播链具有重要意义。同时，研究证实野猪作为哨兵动物在蚊媒病毒监测中的潜在价值。相关成果发表于《Zoonoses and Public Health》。
研究使用的样本来源于荷兰野猪监测计划，由猎人在狩猎后通过心脏穿刺采集血清，并送至瓦赫宁根生物兽医研究所实验室。2018–2021年每年随机选取约380份血清，共计1504份。所有样本先经商品化物种非依赖性ELISA筛查，阳性或可疑样本随后采用病毒中和试验（Virus Neutralization Test, VNT）分别检测WNV和USUV中和抗体。为使模型能够区分真实感染与检测误差，研究人员还纳入了两组阴性对照人群：荷兰家猪（n=14）和挪威野猪（n=50）。在统计分析中，研究人员构建了一个三级贝叶斯分层模型（3-level Bayesian hierarchical model），该模型联合估计个体感染状态、抗体反应（直接反应与交叉反应）以及观察误差。模型参数通过马尔可夫链蒙特卡罗（Markov chain Monte Carlo, MCMC）方法在Rstan中实现估计，并进行了敏感性分析与模型充分性评估。
3.1 血清学结果：在1504份血清中，30.65%（461/1504）呈ELISA阳性或可疑，且阳性比例从2018年的44.89%逐年下降至2021年的20.62%。由于样本量不足或无法判读，55份ELISA阳性样本被排除，最终405份ELISA阳性样本进入模型。基于经典四倍滴度差异判读，USUV阳性呈逐年下降趋势，而结论模棱两可（equivocal）的个体比例在不同年份为5.08%至21.24%不等。这一结果表明，单独使用传统判读方法难以区分单病毒感染与交叉反应。
3.2 模型结果：与不考虑交叉反应的模型相比，纳入交叉反应的基线模型拟合更优（基于LOOIC比较）。模型估计显示，WNV既往感染概率在研究期内为7.82%（2020年）至13.02%（2019年），USUV则从2018年的24.00%降至2021年的5.37%，与经典判读趋势相似但数值更高。WNV感染后预期滴度为39.97，USUV感染后为42.41；交叉反应方面，WNV感染使USUV滴度平均增加27.21，USUV感染使WNV滴度平均增加31.87。WNV感染后发生USUV交叉反应的概率为52.99%，而USUV感染后发生WNV交叉反应的概率为63.17%。观察误差方面，WNV的假阳性概率为9.07%，假阴性概率为10.35%，USUV则分别为2.00%和3.00%；其他观察误差（ε）约在23%–26%。模型模拟还预测，在单病毒感染中，相当大比例的个体因交叉反应而被判读为模棱两可；在共感染动物中，68%会被经典方法判为模棱两可。这些结果揭示了经典方法的局限性，并量化了交叉反应和检测误差对流行率估计的影响。
讨论部分指出，野猪中WNV中和抗体的高比例超出预期，与波兰等欧洲国家未见ELISA阳性的结果形成对比，也明显高于荷兰马和犬的血清阳性率。研究提供了WNV在2018年或之前即已存在的证据，可能与2018年欧洲大规模WNV暴发及当年温暖夏季有利于病毒传播有关。虽然野猪活动范围有限，但不能排除个别动物在德国、比利时或卢森堡等邻国感染的可能。USUV感染概率的下降趋势与2016年大暴发后鸟类中病毒循环减弱相符。研究人员认为，野猪因暴露于蚊虫频率高、活动范围有限且未接种疫苗，是合适的哨兵动物，可补充现有监测体系。研究也存在局限性：缺乏配对阳性/阴性对照血清、无法进行RNA检测导致感染时间不确定，以及模型不能完全消除交叉反应的影响。未来应结合其他终末宿主（如野鸟、马、鸡）的监测，进一步明确局部传播动态。
研究结论：本研究表明，野猪中的WNV感染发生在2020年检测到首批人类病例之前。对野猪中的正黄病毒进行监测可为监测WNV和USUV等蚊媒病毒提供便捷方法。
