《Antibodies》：Ca16Mab-56, a Novel Anti-Cadherin-16/Ksp-Cadherin Monoclonal Antibody for Multiple Applications
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背景/目的：钙黏蛋白-16（CDH16，Ksp-cadherin）具有独特的七个胞外钙黏蛋白重复序列，其表达局限于正常肾上皮。CDH16在肾细胞癌（RCC）中表达下调，并与不良预后相关。因此，开发特异性识别细胞表面CDH16的单克隆抗体（mAb）对于肿瘤诊断和
背景/目的：钙黏蛋白-16（CDH16，Ksp-cadherin）具有独特的七个胞外钙黏蛋白重复序列，其表达局限于正常肾上皮。CDH16在肾细胞癌（RCC）中表达下调，并与不良预后相关。因此，开发特异性识别细胞表面CDH16的单克隆抗体（mAb）对于肿瘤诊断和分离CDH16阳性肾上皮细胞至关重要。方法：研究人员通过用CDH16过表达肿瘤细胞免疫小鼠，随后进行基于高通量流式细胞术的筛选，开发了抗人CDH16单克隆抗体（命名为Ca16Mabs）。结果：在建立的58个Ca16Mabs中，克隆Ca16Mab-56（IgG1，κ）在流式细胞术中特异性识别CDH16过表达的中国仓鼠卵巢-K1（CHO/CDH16）细胞，与21种其他CDH无检测到的交叉反应。Ca16Mab-56还可检测人RCC细胞系（OS-RC-2和KMRC-20）和正常肾上皮细胞系中的内源性CDH16。Ca16Mab-56与CHO/CDH16和OS-RC-2的解离常数（KD）值分别为6.5 × 10?9 M和1.2 × 10?9 M。此外，Ca16Mab-56通过Western blotting检测到内源性CDH16，并在免疫组织化学中对正常肾小管上皮显示强烈染色，在肾细胞癌中显示清晰的膜染色。结论：Ca16Mab-56是检测CDH16的多功能工具，具有肿瘤诊断潜力。
**一、研究背景与科学问题**
钙黏蛋白（cadherin，CDH）家族是介导细胞-细胞黏附的关键分子，对维持组织结构具有重要作用。经典钙黏蛋白含有五个胞外钙黏蛋白（EC）重复序列、单次跨膜结构域以及含有连环蛋白（armadillo家族蛋白）结合位点的胞质尾区。七结构域钙黏蛋白（7D cadherin）亚家族成员CDH16（Ksp-cadherin）及其旁系同源物CDH17（LI-cadherin）因前两个EC重复序列串联重复而含有七个EC重复序列。CDH16特异性表达于哺乳动物肾单位及集合系统上皮细胞的基底外侧膜，在肾细胞癌（RCC）中表达下调，并与透明细胞RCC的不良预后相关。然而，现有抗CDH16单克隆抗体（mAb）多针对胞内C端结构域，缺乏与其他CDH交叉反应的信息，同时适用于流式细胞术和免疫组织化学（IHC）的抗体十分有限。因此，开发特异性识别细胞表面CDH16的mAb对于肿瘤诊断及分离CDH16阳性肾上皮细胞具有重要意义。
**二、研究内容与结论**
研究人员采用基于细胞免疫和筛选（CBIS）方法，以CDH16过表达的LN229细胞免疫BALB/cAJcl小鼠，通过高通量流式细胞术筛选建立了58株抗CDH16 mAb克隆（Ca16Mabs）。其中克隆Ca16Mab-56（IgG1，κ）在流式细胞术中特异性识别CDH16过表达的中国仓鼠卵巢-K1（CHO/CDH16）细胞，与21种其他CDH均无交叉反应。Ca16Mab-56可检测人RCC细胞系（OS-RC-2和KMRC-20）及永生化人正常肾上皮细胞系（RPTEC/TERT1）中的内源性CDH16，与CHO/CDH16和OS-RC-2的结合解离常数（KD）分别为6.5 × 10
?9 M和1.2 × 10
?9 M。Western blotting可检测约100 kDa特异性条带；免疫组织化学显示正常肾远端小管强阳性。该研究发表于《Antibodies》。Ca16Mab-56是检测CDH16的多功能工具，具有肿瘤诊断潜力。
**三、主要技术方法**
主要方法包括：以CDH16过表达LN229细胞腹腔免疫BALB/cAJcl小鼠，脾细胞与P3U1骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤；基于流式细胞术的高通量筛选（CHO/CDH16阳性、CHO-K1阴性）；流式细胞术检测结合亲和力（一部位结合模型拟合计算KD）；Western blotting检测蛋白表达；使用VENTANA BenchMark ULTRA PLUS自动化染色系统对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）细胞
