《Biomedicine & Pharmacotherapy》：Worenine attenuates pulmonary fibrosis potentially through modulation of PBK/SRC-associated TGF-β1/Smad and NF-κB signaling pathways
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目的：采用网络药理学、分子对接和实验验证相结合的综合策略，阐明Worenine在肺纤维化（PF）中的药理学机制。方法：从公共数据库获取Worenine的潜在靶点和PF相关基因，并进行整合以构建相互作用网络。进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）、基因本体论（GO
目的：采用网络药理学、分子对接和实验验证相结合的综合策略，阐明Worenine在肺纤维化（PF）中的药理学机制。方法：从公共数据库获取Worenine的潜在靶点和PF相关基因，并进行整合以构建相互作用网络。进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）、基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，以识别关键靶点和通路。分子对接评估Worenine与核心靶点之间的结合亲和力。在博来霉素诱导的PF小鼠和TGF-β1刺激的A549和MRC-5细胞中验证Worenine的抗纤维化作用及机制。结果：共鉴定出116个重叠靶点。关键靶点包括SRC、IL6、TNF、NFKB1和PIK3CA。富集分析表明，Worenine调节与炎症和细胞应激相关的通路，包括TNF、IL-17和HIF-1信号通路。分子对接显示Worenine与核心靶点如EZH2、PTGS2、PBK、SRC、NFKB1和IL6具有强结合亲和力。在体内，Worenine减轻了肺纤维化，减少了胶原沉积并改善了组织病理学。在体外，Worenine抑制了上皮-间质转化（EMT）和成纤维细胞-肌成纤维细胞转化（FMT），同时抑制了PBK/SRC相关的TGF-β1/Smad、ERK和NF-κB信号通路，并减少IL-6、IL-8和VEGFA的分泌。结论：Worenine可减轻实验性肺纤维化，可能通过调节PBK/SRC相关信号通路以及TGF-β1/Smad、ERK和NF-κB通路发挥作用。这些发现为深入研究Worenine作为PF潜在治疗候选药物提供了依据。
论文解读：Worenine抗肺纤维化作用及机制研究
**研究背景**：肺纤维化（pulmonary fibrosis，PF）是一种慢性、进行性且常致命的肺部疾病，以肺泡上皮细胞损伤、成纤维细胞异常激活和细胞外基质过度沉积为特征，最终导致不可逆的肺功能丧失。目前临床批准用于特发性肺纤维化（IPF）的药物仅有吡非尼酮和尼达尼布，二者虽能延缓疾病进展，但无法逆转，且存在明显副作用。因此，开发更有效、更安全的治疗策略是迫切需求。天然产物因其多靶点特性受到关注，黄连（Coptis chinensis Franch.）中的多种生物碱报道具有抗炎、抗氧化和抗纤维化活性。Worenine是黄连的主要生物碱之一，前期研究显示其可特异性抑制PBK激酶活性，并存在SRC–PBK正反馈环路，但其在PF中的作用和机制尚不清楚。该研究发表在《Biomedicine》杂志上，为阐明Worenine的抗纤维化机制和临床应用潜力提供了新证据。
**研究内容与意义**：研究人员整合网络药理学、分子对接和实验验证，系统研究了Worenine对PF的干预作用。结果表明，Worenine在博来霉素诱导的PF小鼠模型中显著减轻纤维化，并在细胞模型中抑制EMT和FMT，其机制与调节PBK/SRC相关的TGF-β1/Smad、ERK和NF-κB信号通路密切相关。这些发现为Worenine作为PF的候选治疗药物提供了实验依据，也为多靶点抗纤维化策略提供了新视角。
**关键技术方法**：首先通过公共数据库（SwissTargetPrediction、TargetNet、BATMAN-TCM、SuperPred等）预测Worenine靶点，从GeneCards、CTD、OMIM、DrugBank获取PF相关靶点，取交集得到116个共同靶点。利用STRING构建PPI网络，Cytoscape进行拓扑分析，识别核心靶点；通过R软件进行GO和KEGG富集分析；使用AutoDock进行分子对接评估结合亲和力。实验方面，采用C57BL/6J小鼠（Vital River，北京）气管滴注博来霉素（3 mg/kg）建立PF模型，Worenine给药（5 mg/kg/day）21天；细胞实验使用A549和MRC-5细胞（均购自ATCC），以TGF-β1（5 ng/mL）诱导EMT/FMT模型，通过Western blot、ELISA、CCK-8、划痕实验等检测相关指标。
**研究结果**：
**3.1 靶点鉴定与网络分析**：通过多数据库整合和PPI网络分析，鉴定出Worenine与PF的116个共同靶点，其中核心靶点包括SRC、IL6、TNF、NFKB1、PIK3CA等，提示Worenine通过多靶点、多通路发挥治疗作用。
**3.2 GO和KEGG富集分析**：GO分析显示靶点主要富集于凋亡调控、细胞增殖、蛋白磷酸化等生物过程；KEGG富集分析显示靶点主要富集于TNF、IL-17、HIF-1等炎症和细胞应激相关通路，且这些通路汇聚于NF-κB核心炎症级联，表明炎症调节是其重要作用环节。
**3.3 分子对接分析**：Worenine与EZH2、PTGS2、NFKB1、IL6等核心靶点结合能均低于-7.0 kcal/mol，其中与EZH2和PTGS2结合最强（-11.40和-11.15 kcal/mol），并与PBK和SRC稳定结合，验证了网络药理学预测的多靶点相互作用特征。
**3.4 Worenine显著减轻BLM诱导的体内肺纤维化**：在博来霉素诱导的PF小鼠中，Worenine（5 mg/kg/day）显著提高生存率，micro-CT显示肺内高密度区减少，组织学（H&E和Masson染色）显示肺泡结构损伤和胶原沉积减轻，Szapiel和Ashcroft评分及羟脯氨酸含量降低，Western blot证实胶原I和波形蛋白表达下调，证明Worenine具有体内抗纤维化活性。
**3.5 Worenine抑制PF中的EMT，可能与PBK和TGF-β1/Smad及NF-κB信号通路相关**：在TGF-β1诱导的A549细胞中，Worenine（≤50 μM）无显著细胞毒性，可抑制EMT过程（上调E-cadherin，下调胶原I、vimentin、α-SMA），并减少Smad2/3磷酸化和NF-κB p65表达，同时抑制细胞迁移，降低IL-6、IL-8、VEGFA分泌。PBK抑制剂OTS964同样抑制EMT，且Worenine与阳性药吡非尼酮效果相当，提示PBK参与该过程。
**3.6 Worenine抑制PF中的FMT，可能涉及PBK/SRC、TGF-β1/Smad和NF-κB信号通路**：在MRC-5成纤维细胞中，Worenine（≤100 μM）剂量依赖性地抑制FMT，减少α-SMA、胶原I和vimentin表达，同时抑制ERK1/2磷酸化及SRC激活，并降低Smad2/3和NF-κB磷酸化。SRC抑制剂eCF506可抑制TGF-β1诱导的FMT，且明显降低PBK磷酸化，表明SRC与PBK信号存在功能联系。
**讨论总结与结论**：讨论部分指出Worenine的抗纤维化作用涉及多通路，与现有药物吡非尼酮（抑制TGF-β相关信号和胶原合成）和尼达尼布（抑制PDGFR、FGFR、VEGFR）的机制部分重叠但也有不同，提示其可作为一种补充性的多靶点治疗策略。研究局限性包括：缺乏系统药代动力学和组织分布数据，仅使用单一博来霉素模型，未进行PBK特异性敲减/敲除或过表达研究，PBK–SRC因果关系仍需遗传学验证。未来可借助植物来源细胞外囊泡样纳米颗粒（P-ELN）递送Worenine以提高生物利用度和靶向性。结论：Worenine通过抑制EMT、FMT和炎症反应，至少部分通过调节PBK/SRC相关信号及抑制TGF-β1/Smad和NF-κB通路，发挥抗肺纤维化作用，支持其作为天然产物来源候选药物的进一步开发。
