表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）通过靶向关键病毒蛋白并调控宿主脂质代谢抑制非洲猪瘟病毒复制

《Emerging Microbes & Infections》：Epigallocatechin Gallate (EGCG) Inhibits African Swine Fever Virus Replication by Targeting Key Viral Proteins and Regulating Host Lipid Metabolism

　　

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的一种高致病性猪传染病，在家猪中死亡率接近100%，给全球养猪业造成严重经济损失。尽管越南等少数地区近期批准了减毒活ASF疫苗，但全球范围内普遍安全、获授权商业疫苗和有效抗病毒治疗药物仍然缺乏，因此迫切需要创新抗ASFV干预策略。研究人员通过基于分子对接的虚拟筛选发现，绿茶主要生物活性多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）具有显著抗ASFV增殖作用。病毒生命周期实验表明，EGCG主要靶向内吞后进入及进入后基因组复制阶段。分子对接结合生物膜干涉技术（BLI）证实EGCG与ASFV两个不可或缺蛋白p72和p1192R高亲和力直接结合。此外，EGCG剂量依赖性激活AMP活化蛋白激酶（AMPK）信号通路，下调脂质合成相关基因，并逆转ASFV诱导的脂滴积累以及总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和游离脂肪酸（FFA）异常升高，从而破坏病毒复制所需的脂质代谢微环境。综上，EGCG通过双重机制抑制ASFV复制：靶向关键病毒蛋白与调控宿主脂质代谢。该研究凸显EGCG作为有前景抗ASFV候选物，并为抗ASFV药物开发提供新理论基础。

研究背景方面，非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV；一种大型、结构复杂双链DNA病毒，归Asfarviridae科）感染引起的急性发热高度接触性猪病，家猪死亡率可达100%。自1921年肯尼亚首次报道后，ASF已扩散至多国，对全球 swine 产业、食品安全与社会稳定造成重创。ASFV编码超过150种蛋白，免疫逃逸与环境适应能力强，疫苗开发困难；虽减毒活疫苗在越南获商业许可，但安全性、遗传稳定性与交叉保护力仍待解决，全球缺乏获批商业疫苗与特异治疗药物，防控主要依赖生物安全、早期诊断与扑杀。天然产物因生物活性丰富、安全性好、多靶点特性成为抗病毒药物重要来源。研究人员据此开展研究，旨在明确EGCG的抗ASFV活性与机制。

论文发表于《Emerging Microbes 》。研究人员通过体外细胞与病毒模型证实，EGCG可有效抑制ASFV复制，并揭示其通过直接靶向病毒蛋白p72与p1192R，以及激活宿主AMPK通路调控脂质代谢的双重机制，为抗ASF药物开发提供理论与候选分子。

关键技术方法方面，研究人员使用猪肺泡巨噬细胞（PAMs；源自28日龄无特定病原SPF猪）及LLC-PK1、Vero等细胞，搭配ASFV-II型ASFV-0428C、重组ASFV-GFP及I/II型重组株ASFV-HN10005等病毒材料，在BSL-3实验室开展研究；以CCK-8测细胞毒性、TCID₅₀测病毒滴度、qPCR/qRT-PCR测病毒与宿主基因、免疫荧光与Western blotting分析蛋白、时间加药与阶段特异性实验定位病毒生命周期、AutoDock Vina分子对接、HEK293F表达并纯化p72/p1192R、BLI测结合动力学、CRISPR/Cas9敲除病毒基因、BODIPY染脂滴与生化试剂盒测TC/TG/FFA、AMPK抑制剂多索吗啡（dorsomorphin） rescue 实验。

研究结果如下。

EGCG inhibits ASFV replication in vitro：研究人员以重组ASFV-GFP与CCK-8确定EGCG在非细胞毒浓度下剂量依赖性抑制Vero、LLC-PK1和PAM中ASFV增殖，40 μM时GFP信号近消失，子代病毒滴度降2–3个数量级，p72蛋白表达受抑，IC₅₀ 5.2–8.3 μM，选择指数（SI）11.7–33.1。

EGCG targets the post-entry replication stage of ASFV infection：时间加药与吸附、内吞、复制阶段实验显示，EGCG不影响吸附，轻度损害内吞，但显著阻断进入后复制；早期基因CP204L/p30转录几乎不受抑，晚期基因B646L/p72 mRNA与病毒基因组DNA剧降， confocal 见病毒工厂形成被破坏，说明EGCG阻断早期转录向DNA复制与晚期形态发生转换。

Molecular docking demonstrated robust binding affinity between EGCG and p72/p1192R proteins：分子对接显示EGCG与p72、p1192R最优结合自由能分别为-9.3 kcal/mol与-10.0 kcal/mol，氢键与疏水接触构成互作网络；多序列比对表明结合口袋残基在I/II型及多地区分离株中100%保守。

EGCG interacts with p72 and p1192R proteins to impair viral replication：BLI证实p72-EGCG解离常数K_D=5.42×10^?8 M，p1192R-EGCG K_D=3.14×10^?7 M；CRISPR/Cas9靶向敲除p72/P1192R后ASFV复制与滴度大降，尤其p72敲除降约2 log₁₀，证明两蛋白为病毒必需且EGCG直接互作贡献抗病毒效应。

EGCG alleviates lipid metabolism dysregulation induced by ASFV infection：BODIPY染色与试剂盒检测显示ASFV感染升脂滴、TC、TG、FFA，EGCG处理逆转该代谢重编程，削弱病毒所需脂质环境。

EGCG inhibits ASFV replication by regulating lipid synthesis through the AMPK pathway：Western blotting见EGCG剂量与时间依赖性升高磷酸化AMPK（p-AMPK）；qRT-PCR示ACACA、ACACB、FASN、SCD1、HMGCR、SREBF1、SREBF2等脂质合成基因被下调；AMPK抑制剂dorsomorphin部分恢复EGCG被抑的病毒复制，证 AMPK 介导脂质调控抗病毒。

EGCG exhibits broad-spectrum antiviral activity against multiple porcine viruses：EGCG对I/II型重组ASFV变体、伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）均浓度依赖性抑复制，40 μM近完全阻断，具广谱猪病毒抑制潜力。

讨论部分总结：研究人员指出，EGCG以“病毒蛋白直接靶向＋宿主代谢调控”双协同机制降低单靶点耐药风险；p72为衣壳主要蛋白、p1192R为II型拓扑异构酶，EGCG分别造成空间位阻与催化循环阻断；AMPK激活剥夺脂质底物，与茶源多酚theaflavin具共性但EGCG多一层直接抗病毒维度。Broad-spectrum 源于脂质代谢等保守通路。局限为仅体外、未做体内、EGCG稳定性与水溶性差，需纳米/脂质体递送与联合用药探索。

结论翻译：尽管存在体内验证局限，本研究系统阐明EGCG抑制ASFV复制的双重机制，凸显其广谱抗病毒潜力，并确立其作为天然、安全、多靶点抗病毒候选的优势。这些发现为新型抗ASFV策略设计提供新见解，并为开发基于EGCG的治疗药物以防控ASF及其他猪病毒病奠定基础。