《Frontiers in Immunology》：Analyzing the cytotoxicity and pro‐tumorigenic role of acetyl tributyl citrate in prostate through network toxicology and the immune microenvironment
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背景：乙酰柠檬酸三丁酯（ATBC）是邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）与双酚A（BPA）的替代增塑剂，可能参与多种癌症发生，但ATBC在前列腺癌（PCa）中的细胞毒性与促肿瘤作用尚不明确。方法：研究人员通过整合GEO、ChEMBL、STITCH与Swi
背景：乙酰柠檬酸三丁酯（ATBC）是邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）与双酚A（BPA）的替代增塑剂，可能参与多种癌症发生，但ATBC在前列腺癌（PCa）中的细胞毒性与促肿瘤作用尚不明确。方法：研究人员通过整合GEO、ChEMBL、STITCH与Swiss Target Prediction等数据库识别ATBC相关PCa潜在靶点，构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，并进行基因本体（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集及免疫微环境分析；继而用支持向量机递归特征消除（SVM-RFE）与最小绝对收缩与选择算子（LASSO）筛选核心靶点，以癌症基因组图谱（TCGA）与外源数据集及体外实验验证；以分子对接考察ATBC与核心基因产物结合，并在单细胞RNA测序数据中做虚拟敲低与通路富集。结果：研究人员获45个ATBC-PCa交集靶点，机器学习确定EZH2、DNMT1、PRMT5三个核心靶点，其影响PCa免疫浸润；分子对接与体外实验佐证上述靶点；虚拟敲低显示三者维持胶原丰富细胞外基质（ECM）与细胞-基质黏附、维护前列腺间质稳态，其扰动介导ATBC细胞毒性与促肿瘤效应。结论：该研究将ATBC效应与PCa联系起来，为高ATBC暴露环境下PCa防治策略提供依据。
研究背景方面，DEHP与BPA作为常见增塑剂存在于化妆品、药物与医用包装中，可在人体组织及尿液检出并诱导氧化应激、凋亡与代谢紊乱。ATBC因其被认为安全而被广泛用作替代增塑剂，见于黏合剂、涂层与医疗设备；但其与聚合物结合不稳定，可从食品包装与医疗器械浸出，在中国室内灰尘中达13,800 ng/g，并见于多国水体。约99% ATBC经尿、粪或呼气排出，已有研究提示其可上调人肠细胞细胞色素P4503A4、抑制成骨细胞系增殖迁移、致大鼠骨质疏松，并可能助推骨癌与口腔鳞癌进展。PCa具年龄、种族与家族史等危险因素，晚期约80%发生骨转移，雄激素与雄激素受体（AR）为核心驱动。近期研究提示ATBC具雌激素受体拮抗与AR激动特征，且人前列腺肿瘤与癌旁组织检出微塑料，但ATBC与PCa进展关系未明。因此研究人员开展网络毒理学与体外研究，阐释ATBC在PCa中的毒理通路。论文发表于《Frontiers in Immunology》。
关键技术方法方面，研究人员取GEO的GSE38241、GSE27616、GSE6956等PCa转录队列与ChEMBL、STITCH、Swiss Target Prediction获ATBC靶点；以STRING与Cytoscape建PPI网络；用LASSO与SVM-RFE筛特征基因并以TCGA-PRAD、GSE32269验证；以CIBERSORT评免疫浸润；取TISCH中GSE143791单细胞队列做UMAP分群与scTenifoldKnk虚拟敲低；以AutoDock Vina做ATBC-EZH2/DNMT1/PRMT5分子对接；以CCK-8、克隆形成、划痕与Transwell及qRT-PCR在WPMY-1与PC-3细胞中做体外印证。
Identification of targets of ATBC and PCa：研究人员从三个GEO数据集识得4,187个PCa差异表达基因（DEGs），从三类数据库得275个ATBC靶点，交集45个潜在靶点，维恩图与网络图显示ATBC-PCa候选基因关系。
Go and KEGG enrichment analysis：对45个靶点做GO与KEGG富集，生物过程集中于组蛋白修饰、甲基化、肽基-赖氨酸修饰；细胞组分涉异染色质、甲基转移酶复合体；分子功能涉S-腺苷甲硫氨酸依赖甲基转移酶；KEGG富集于Notch信号、癌症蛋白聚糖、ECM-受体互作、甲状腺激素信号、细胞色素P450异物代谢与前列腺癌等通路。
Interaction network of potential targets：STRING建45节点125边PPI网，Cytoscape按度中心性显示EZH2、HDAC1、EHMT2、DNMT1为关键节点，并给出前10关键靶点子网络。
Machine learning predicts characteristic genes：LASSO得8个特征基因，SVM-RFE得4个，与PPI度中心性交集获EZH2、DNMT1、PRMT5；GSE32269中PRMT5（AUC=0.822）、DNMT1（AUC=0.914）、EZH2（AUC=0.825）具诊断效能。
TCGA-PRAD and HPA validation：TCGA-PRAD中三基因在肿瘤显著高表达且互相相关，AUC超0.75；人类蛋白质图谱（HPA）免疫组化示PCa组织较正常组织染色更强，印证蛋白过表达。
Immune infiltration of ATBC in PCa：CIBERSORT示PCa免疫格局改变；PRMT5与DNMT1正关M2巨噬细胞、静息树突细胞、活化NK等，负关M0巨噬细胞、调节性T细胞（Tregs）；EZH2正关M2巨噬细胞、负关静息NK，提示ATBC相关基因重塑PCa免疫微环境。
Single-cell analysis reveals hub gene expression patterns within tumor microenvironment：GSE143791的UMAP分出B细胞、CD4T、CD8T、DC、内皮、红系、恶性细胞、单核/巨噬、NK、成骨、破骨、周细胞、浆细胞、祖细胞、pDC等；EZH2在红系与祖细胞高，DNMT1在CD4T/CD8T/单核巨噬/红系/祖细胞高，PRMT5在红系与祖细胞高，说明ATBC相关基因影响微环境细胞组成。
Identification and functional analysis of hub genes KO-responsive genes：对三基因做计算机虚拟敲低，后续差异基因富集于细胞组分装配、胶原类ECM结构与细胞-基质黏附；提示EZH2、DNMT1、PRMT5维持正常前列腺间质表观与结构稳态，ATBC或经扰乱该稳态致毒性。
Toxic effects of ATBC on prostate cells：WPMY-1中2.5 μM起增殖线性下降，5 μM显著抑制克隆形成、迁移与侵袭；qRT-PCR示EZH2、PRMT5、DNMT1 mRNA随ATBC升高而降，说明ATBC损正常前列腺间质稳态。
ATBC promotes the proliferation and migration of PCa cells in vitro：PC-3中5 μM起ATBC促增殖、克隆形成、划痕闭合与Transwell侵袭，呈现对癌细胞促进展、对间质细胞抑功能的双向效应。
Molecular docking situation：AutoDock Vina示EZH2（-7.2 kcal/mol）、PRMT5（-6.5 kcal/mol）、DNMT1（-5.7 kcal/mol）与ATBC结合能低于-5.0 kcal/mol，PyMOL显示稳定结合构象与关键残基界面。
讨论部分总结：EZH2属Polycomb抑制复合体2（PRC2），催化H3K27me3沉默抑癌基因；PRMT5经精氨酸甲基化增强AR转录活性、推.castration-resistant进展；DNMT1维持DNA甲基化、与EZH2协同促PCa迁移侵袭。三靶点为表观遗传枢纽，可影响NK、Tregs、M2巨噬等免疫组分。网络毒理加速微塑料毒物机制识别，但研究限于WPMY-1与PC-3、缺动物模型与ATBC暴露单细胞、短暴露难代长期人体效应，需大人群与慢性低剂量动物验证。
结论部分翻译：总体而言，研究结果将ATBC效应与PCa联系起来，并为高ATBC暴露环境中的PCa预防与治疗策略提供依据。
