冷冻奥司他韦15 mg/mL口服溶液在琥珀色玻璃瓶中的稳定性研究

《Pharmaceutics》：Stability Study of a Frozen Oseltamivir 15 mg/mL Oral Solution in Amber Glass Bottles

　　

背景/目的：奥司他韦是一种广泛使用的抗病毒药物，用于治疗流感，并在大流行防范策略中发挥核心作用。尽管临时配制的15 mg/mL口服溶液已被收载于处方集，但在大流行期间大量制备需要延长储存方案。然而，目前尚无关于奥司他韦15 mg/mL口服溶液在冷冻及随后冷藏条件下、覆盖标准疗程时长的稳定性研究。本研究旨在评估由原料药（API）配制并包装于琥珀色玻璃容器中的15 mg/mL奥司他韦口服溶液的物理化学及微生物稳定性。方法：使用奥司他韦磷酸盐原料药、苯甲酸钠作为防腐剂以及纯化水配制口服溶液，然后分装于125 mL II型琥珀色玻璃瓶中，留出热膨胀空间。样品在?20 ± 2 °C下冷冻储存最长75天，解冻后在冷藏条件（5 ± 3 °C）下继续储存最长10天。采用依据ICH指南验证的高效液相色谱（HPLC）方法评估化学稳定性，并将化学稳定性定义为初始浓度的90–110%回收率。同时评估物理稳定性（颜色、pH、颗粒物、结晶和均一性）及微生物稳定性。结果：HPLC方法表现出优异的线性、精密度和准确度。在整个75天冷冻储存期内，奥司他韦浓度始终保持在预设的可接受限度内，pH、颜色或颗粒形成均无显著变化。解冻后，在冷藏条件下药物浓度继续完全稳定，并在10天内保持在所需限度内。尽管经历了长时间储存和相变，物理参数未见显著变化，微生物检测确认研究最后一天需氧菌、厌氧菌和真菌均未检出。结论：奥司他韦15 mg/mL口服溶液在琥珀色玻璃瓶中，于冷冻条件下（75天）加解冻后冷藏条件（10天）共85天内具有物理化学和微生物稳定性。

奥司他韦是一种口服活性前体药物，广泛用于成人和儿童（包括足月新生儿）甲型和乙型流感的治疗与预防。其活性代谢物奥司他韦羧酸通过选择性抑制病毒神经氨酸酶，阻断病毒颗粒的释放与播散。在大流行暴发（如2009年甲型H1N1流感）及季节性流行期间，儿童、老年人和吞咽困难患者对口服液体制剂的需求尤为迫切，而胶囊剂不适合此类人群。公共卫生和医院药房需要临时配制口服制剂，但在突发公共卫生事件中按患者逐一配制存在严重的后勤和时间瓶颈，因此亟需稳健的长期储备策略。德国国家处方集（DAC/NRF）收载了“奥司他韦口服溶液15 mg/mL成人或儿童用”专论，以奥司他韦磷酸盐原料药、纯化水和苯甲酸钠为组分，但已有稳定性数据仅涵盖冷藏或室温条件。奥司他韦在水溶液中存在化学不稳定性，其降解遵循双指数动力学，涉及乙酯不可逆水解和乙酰基可逆分子内迁移，生成毒性受限的异构体I等降解产物。此外，容器类型也会影响稳定性。目前缺乏关于奥司他韦15 mg/mL水溶液冻存及冻融后使用的系统评价，特别是冰晶形成、冷冻浓缩、解冻后再分散性和治疗期间冷藏储存的影响尚未明确。因此，研究人员开展了此项研究，评估由原料药配制、包装于II型琥珀色玻璃瓶中的奥司他韦15 mg/mL口服溶液，在?20 °C冷冻储存75天、解冻后5 °C冷藏储存10天的双相保存方案下的物理化学和微生物稳定性。

研究人员按照DAC/NRF专论制备了三个批次的口服溶液，使用奥司他韦磷酸盐原料药（购自Roche Farma，马德里，西班牙）、苯甲酸钠原料药（Acofarma Distribución, S.A.，马德里，西班牙）和纯化水，每瓶装量50 mL于125 mL II型琥珀色玻璃瓶中（允许冷冻膨胀），冷冻组样品在?20 ± 2 °C下放置75天，取样后转入冷藏组，在5 ± 3 °C下再放置10天。化学稳定性采用经验证的HPLC方法测定，依据欧洲药典奥司他韦磷酸盐含量测定方法并按ICH Q2（R1）指南进行线性、精密度和准确度验证，以浓度恢复至初始值的90–110%为稳定标准。物理稳定性通过宏观目视检查（颜色、可见颗粒、外观）、pH测定和显微镜下结晶评估。微生物稳定性在冷藏第10天采用BD BACTEC?荧光系列系统，分别接种需氧菌/真菌培养基和厌氧菌培养基，培养5天后根据CO?产生情况判断有无微生物生长。该方法未进行专门的强制降解实验，但每日以标准溶液对照确认峰保留时间。

3.1 分析方法验证
HPLC方法在0.3–1.0 mg/mL范围内线性关系优良，决定系数为0.9992；日内相对标准偏差（RSD%）为0.264%–0.596%，日间RSD%为0.378%–0.608%，均满足ICH重复性和中间精密度标准。三个浓度水平的回收率为99.425%–100.700%，在98%–102%接受区间内。检测限（LOD）为0.030 mg/mL，定量限（LOQ）为0.100 mg/mL。另确认了色谱图中约4–5分钟处的峰为防腐剂苯甲酸钠的紫外吸收峰，不影响奥司他韦定量。

3.2.1 冷冻条件
在75天冷冻储存期间（取样日包括D0、D4、D11、D18、D28、D42、D60、D75），奥司他韦平均回收率始终保持在90%–110%的预设限度内，pH值无显著变化，溶液颜色、澄清度、可见颗粒和结晶均未发生改变。因此，该口服溶液在?20 °C下物理和化学稳定至少75天。

3.2.2 冷藏条件
将冷冻储存0、4、28、42、75天后的样品解冻并转移至2–8 °C继续存放10天，奥司他韦浓度在D75-10仍保持在规定限度内，回收率曲线平稳。整个冷藏期内pH、颜色、可见颗粒、浊度和结晶均无显著变化。表明解冻后在冷藏条件下可稳定10天。

3.2.3 微生物稳定性
在冷藏第10天（即总研究第85天），对所有批次样品进行需氧菌、厌氧菌和真菌培养，结果均为阴性。说明经冷冻储存和多次取样后，防腐体系未失效。

讨论部分指出，以往关于奥司他韦口服制剂稳定性的研究多在室温或冷藏条件下进行，商业口服混悬液标签标明“请勿冷冻”，但该说明是针对特定产品的储存限制，并不证明冷冻对所有水性奥司他韦制剂均不适用。本研究首次评价了?20 °C冷冻75天联合5 °C冷藏10天的双相保存方案。冷冻过程中可能出现冰晶形成、溶质冷冻浓缩、局部pH漂移、沉淀或结晶以及容器机械应力等风险，但实验结果未观察到上述不利影响。可能的机理解释包括：极低温显著降低了分子热运动和反应速率常数，使水解和异构化动力学被有效抑制；溶液pH接近该药物最稳定的pH 4.0，未发生显著酸碱催化降解；奥司他韦磷酸盐溶解度极高，解冻后轻柔摇动2分钟即可完全再分散，无结晶或可见颗粒；包装采用125 mL瓶子装50 mL溶液，留有超过50%的顶部空间，避免了冻融造成的容器破损，并保证了容器封闭完整性，微生物检测阴性提示苯甲酸钠在冷冻后仍保持抗菌活性。研究局限性在于验证的等度色谱方法仅严格定量活性成分回收率，未单独追踪奥司他韦羧酸、异构体I和异构体II等微量降解产物；未来应开展更长期冻存研究并加入这些杂质的同步定量和正式防腐效力试验。

研究结论：在具体评估条件下，由原料药配制、以苯甲酸钠防腐的奥司他韦磷酸盐15 mg/mL口服溶液，在75天冷冻储存和随后解冻后额外10天冷藏储存期间，化学浓度始终处于预设的可接受限度内。未观察到相关物理变化，研究结束时进行的微生物检测结果为阴性。这些发现支持将该储存策略用于医院药房制剂制备。