《Journal of Functional Biomaterials》：Long-Term In Vivo Biological Performance of PLLA–b–PEG/HA Filler
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目的：本研究旨在评估一种新型聚左旋乳酸-嵌段-聚乙二醇/透明质酸（poly-L-lactic acid-block-polyethylene glycol/hyaluronic acid，PLLA–b–PEG/HA）复合填充剂用于软组织增量时的长期降解行为、生
目的：本研究旨在评估一种新型聚左旋乳酸-嵌段-聚乙二醇/透明质酸（poly-L-lactic acid-block-polyethylene glycol/hyaluronic acid，PLLA–b–PEG/HA）复合填充剂用于软组织增量时的长期降解行为、生物刺激效应和生物相容性。方法：研究人员通过扫描电子显微镜（scanning electron microscopy，SEM）、X射线衍射（X-ray diffraction，XRD）、傅里叶变换红外光谱（Fourier-transform infrared spectroscopy，FTIR）、氢核磁共振波谱（1H NMR）、热重分析（thermogravimetry，TG）和差示扫描量热法（differential scanning calorimetry，DSC）表征PLLA–b–PEG/HA微球性质；建立104周新西兰兔在体模型，系统观察填充剂降解与组织反应；采用超声监测、组织学染色、酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）评估体积变化、炎症反应和胶原合成相关信号。结果：理化测试表明PLLA–b–PEG在保留原始PLLA基本理化性质的同时亲水性增强；B超显示体内分布均匀，不随时间的位移或扩散，降解稳定可预测；SEM证实微球形态渐进降解和孔隙演化；填充剂诱导轻度、平衡的炎症微环境，早期促炎（IL-12、TNF-α）与抗炎（IL-4）细胞因子表达后逐渐消退；转化生长因子-β（transforming growth factor-beta，TGF-β）持续上调贯穿104周，驱动持续新生胶原和显著新生弹性纤维，实现长期组织重塑和优良生物相容性。结论：该PLLA–b–PEG/HA复合填充剂具有可控降解特性和稳态调节作用，长期生物安全性和组织整合能力突出，可作为理想生物刺激填充剂促进富含胶原纤维和弹性纤维的高质量功能性细胞外基质（extracellular matrix，ECM）再生，在天然、持久软组织填充应用中具临床前景。
研究背景方面，传统纯聚左旋乳酸（poly-L-lactic acid，PLLA）填充剂虽可刺激胶原生成，但非受控异物反应易导致肉芽肿、瘢痕增生和炎症不良事件；现有PLLA–b–PEG相关短期和中期研究虽已证实一定优势，但超过1至2年的长期在体观测数据仍缺乏，其对持续容积矫正、持久胶原刺激和长期生物安全性的系统理解受限。此外，微球与宿主组织在不同解剖层次的交互差异、PLLA–b–PEG微球触发的具体细胞与分子机制尚未充分阐明。因此，研究人员在《Journal of Functional Biomaterials》发表该项研究，通过体外理化表征与104周兔在体植入模型，评价新型PLLA–b–PEG/HA复合填充剂的长期降解、生物相容性、组织重塑及层次差异性反应，以支撑其在面部轮廓重建中的临床转化。
主要关键技术方法上，研究人员以30只4月龄雄性新西兰兔为动物队列，随机分为4、26、52、78、104周五个观察组别，每组6只；采用SEM、XRD、FTIR、1H NMR、TG与DSC进行材料理化表征；在头皮顶骨与背部皮下多点植入含PLLA–b–PEG微球、透明质酸（hyaluronic acid，HA）和盐酸利多卡因的注射悬液；以高频B超动态量化植入物体积与深度；通过H&E、Masson、Alcian blue、Picrosirius red、Herovici与Movat染色进行组织学评价；以SEM观察原位组织与洗脱微球超微形态；以RT-PCR检测Wnt10、β-catenin、α-SMA、Collagen I/III基因；以ELISA检测IL-12、TNF-α、TGF-β、IL-4蛋白水平。
研究结果部分，3.1 体外理化表征结果显示，SEM见微球规则球形、HA均匀包覆；XRD表明PEG段未改变PLLA的α晶型；FTIR未见新化学峰，1H NMR中δ=3.64 ppm峰证实PLLA–b–PEG嵌段共聚物合成；TG显示三段热降解，DSC提示PLLA相结晶度约67.4%、PEG段受限结晶。3.2 在体超声与体积变化结果显示，植入物回声均匀、无位移扩散，体积渐减，26周起纤维组织高回声替代填充剂低回声，78至104周无明显填充剂特异回声。3.3 不同部位在体组织反应结果显示， periosteum（骨膜）与皮下炎症均于52周达峰、78周下降、104周近正常；皮下反应强于骨膜；Masson见新生胶原由外向内长入，Herovici见早期细丝状未成熟胶原、52周后厚束状成熟胶原，Movat见弹性纤维26周达峰且皮下多于骨膜，104周仍高于空白。3.4 SEM观察结果显示，4至26周微球完整伴表面孔隙，52周缺陷与蜂窝结构，78周完全碎裂不可洗脱，104周原位见致密成熟胶原。3.5 分子生物学检测结果显示，RT-PCR中Wnt10/β-catenin早上调，α-SMA与Collagen I先升、Collagen III稍晚；ELISA中IL-12、TNF-α、IL-4于4周升高、78周回落，IL-12在78周再升，TGF-β全程显著上调并与弹性纤维和胶原持续合成一致。
讨论部分总结，研究人员指出PEG修饰在保留PLLA核心性质同时提升亲水性与生物相容性；该填充剂呈蜂窝状有序降解，避免尖锐碎片与迟发异物炎症；HA矩阵早期提供容积支撑并缓冲乳酸释放，微球诱导轻度异物反应，使M2样修复伴随TGF-β与Wnt10/β-catenin协同，推动胶原与弹性纤维同步再生而非单纯纤维化；骨膜层反应弱于皮下，印证层次差异；研究局限为缺传统PLLA头对头对照、信号通路蛋白后修饰未全解析、兔模型不能完全代表人脸软组织，但主线结论稳健。
结论部分翻译为：本研究将体外理化表征与104周兔皮下植入模型结合，系统评价新型PLLA–b–PEG/HA复合填充剂的长期生物学性能。研究人员证实PEG功能化在制备过程中有效增强PLLA亲水性，同时完整保留其核心理化性质，弥补传统未修饰PLLA填充剂固有不足。该复合填充剂呈现协调双效机制：HA基质提供即时结构支撑与容积矫正，PLLA–b–PEG微球介导持续性建设性组织重塑，实现III型胶原与弹性纤维同步再生；HA通过减弱早期炎症反应和构建有利再生微环境，在局部组织稳态调控中发挥关键作用。综上，该填充剂具备优良长期生物相容性，在天然、耐久软组织增量中具有显著临床潜力。
