《Microorganisms》：Multi-Laboratory Evaluation of Modified BAM Chapter 19b and Long-Term Detection of Cyclospora cayetanensis in Fresh Salsa/Pico de Gallo
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环孢子虫（Cyclospora cayetanensis）是一种食源性寄生虫，可引起人类腹泻病环孢子虫病。多次C. cayetanensis暴发疫情与含有未煮香菜（cilantro）的墨西哥风味菜肴相关。用于检测C. cayetanensis的《细菌学分析手册
环孢子虫（Cyclospora cayetanensis）是一种食源性寄生虫，可引起人类腹泻病环孢子虫病。多次C. cayetanensis暴发疫情与含有未煮香菜（cilantro）的墨西哥风味菜肴相关。用于检测C. cayetanensis的《细菌学分析手册》（Bacteriological Analytical Manual, BAM）第19b章方法已在香菜中完成验证，但尚未在含有香菜等复杂食品（如新鲜Salsa/Pico de Gallo）中验证。先前研究中，在新鲜Salsa/Pico de Gallo中对该BAM方法进行了特定改良，以实现C. cayetanensis的最佳检测。本研究使用更新后的BAM第19b章基于线粒体的qPCR（Mit1C qPCR）进一步评估了这些改良在新鲜Salsa/Pico de Gallo中的表现。六个FDA实验室各分析了6份盲码Salsa/Pico de Gallo测试样本，包括两份未接种样本、三份接种5个卵囊的样本和一份接种200个卵囊的样本。所有实验室均执行了更新的洗涤和DNA提取改良步骤。各实验室对接种200个卵囊、5个卵囊和未接种的新鲜Salsa/Pico de Gallo样本的C. cayetanensis总体检出率分别为100%（6/6）、100%（18/18）和0%（0/12）。该方法在所有实验室中表现出极高的敏感性和高重现性。未接种样本在每个实验室均呈阴性，表明对C. cayetanensis具有高特异性。这是首次在复杂基质（如新鲜Salsa/Pico de Gallo）中使用更新版BAM第19b章（Mit1C qPCR）检测C. cayetanensis的性能评估。第二项研究评估了在接种C. cayetanensis的新鲜Salsa/Pico de Gallo样本中寄生虫的长期存在情况，并在接种后分析至三周。研究每个时间点样本均检出寄生虫阳性，表明该方法可用于暴发调查中检测保存至三周的新鲜Salsa/Pico de Gallo剩余样本中的寄生虫。评估和采用有效方法在高风险新鲜农产品和预制菜肴中检测C. cayetanensis，对于监测和应对正在发生的疫情至关重要。
环孢子虫（Cyclospora cayetanensis）是一种环境持久的食源性寄生虫，自20世纪90年代以来在美国和加拿大引发多起暴发，感染通常与食用未煮熟的受污染新鲜农产品相关。多个暴发集群被追溯到墨西哥风味餐厅中含生香菜的菜肴，而新鲜Salsa/Pico de Gallo正是一种由番茄、洋葱、香菜、辣椒和柠檬汁等生鲜配料制成的不经烹饪的复杂食品，被认为是C. cayetanensis感染的高风险商品。然而，现行《细菌学分析手册》（Bacteriological Analytical Manual, BAM）第19b章的检测方法虽已在香菜、覆盆子、长叶莴苣及欧芹等单一基质中完成验证，却未在类似Salsa/Pico de Gallo的复杂基质中开展过多实验室评估。由于复杂菜肴中多种成分可能干扰卵囊回收和核酸扩增，其检测性能尚不清楚。此外，C. cayetanensis卵囊无法通过体内或体外培养富集，临床样本来源有限，而低至1～10个卵囊即可致病，因此需要高灵敏度和特异性的分子检测方法。本研究旨在通过多实验室协作验证更新版基于线粒体靶基因的实时荧光定量PCR（Mit1C qPCR）在新鲜Salsa/Pico de Gallo中的检测能力，并评估长期储存后该寄生虫的可检出性，以模拟暴发调查中剩余样本的实际场景。该论文发表在《Microorganisms》。
研究人员所用主要技术方法包括：从美国食品药品监督管理局（FDA）下属六个实验室征集协作，由协调实验室制备盲码新鲜Salsa/Pico de Gall
