简要摘要
严重的α0-地中海贫血是一种遗传性血液疾病，在东南亚地区造成了重大的健康负担。现有的检测方法对于资源有限的社区来说过于复杂、缓慢且昂贵。为解决这一问题，我们开发了一种快速、简便且经济实惠的检测方法。针对--SEA缺失，引物工程成功引入了合成PAM位点，使得在缺乏合适天然PAM位点的情况下也能实现Cas12a检测。我们的方法在恒温条件下工作，耗时不到40分钟，且无需使用昂贵的实验室设备。该平台的准确率超过98%，并且在无痛样本（而非血液样本）中也有效工作。该检测具有多种适合在资源有限环境中使用的特性。这对社会很有价值，因为它提供了一种简便、经济的α0-地中海贫血筛查方法。
摘要
α0-地中海贫血的东南亚型（--SEA）和泰国型（--THAI）缺失构成了重大的全球健康负担，在东南亚地区患病率很高。传统的检测方法如聚合酶链反应（PCR）因复杂性、时间和成本而受限于资源匮乏的环境。本研究开发了一种针对即时检测（POC）应用的快速简便方案。三种分别针对野生型DNA、--SEA和--THAI缺失的检测利用重组酶聚合酶扩增（RPA）技术在37°C恒温下进行快速DNA扩增，运行时间为10分钟，无需热循环仪。扩增产物通过高特异性的CRISPR-Cas12a系统进行检测，并通过荧光视觉读取或结合侧向层析试验（LFA）在30分钟内完成读数。合成PAM位点的成功工程构建使得Cas12a能够识别--SEA靶标，即使在缺乏合适天然PAM位点的情况下也是如此。该平台在74例盲法临床样本中表现出高精度，在222项靶标评估中实现了98.20%的诊断准确率、94.59%的敏感性和100%的特异性。从无创样本中的检测准确率达到80%至100%，具体取决于提取方法和读数格式。我们的平台显示了满足资源有限环境中诊断测试多项ASSURED标准的潜力，展示了在α0-地中海贫血（--SEA）和（--THAI）遗传筛查中广泛应用的巨大潜力。
