伊氏锥虫：组织蛋白酶L样肽酶的分子特征及作为潜在治疗靶点的验证

《Pathogens》：Trypanosoma evansi: Molecular Characterization and Validation of a Cathepsin-L-like Peptidase as a Potential Therapeutic Target

　　

C1A半胱氨酸肽酶（CPs）是宿主-寄生虫相互作用的主要贡献者，并已被提议作为抗锥虫的化学治疗靶点。伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）是分布最广泛的非洲起源动物锥虫，引起称为“Surra”（苏拉病）或“derrengadera”的锥虫病。明胶酶谱法结合肽酶类别特异性抑制剂，在伊氏锥虫裂解物中鉴定出四种相对分子质量为28、31、36和40 kDa的CPs（p28、p31、p36和p40）。伊氏锥虫裂解物中的CPs优先水解Z-Phe-Arg-AMC荧光底物，而非Z-Gly-Arg-AMC和Z-Ala-Arg-AMC，并且Z-Phe-Arg-AMC的水解被K11777（也称为SLV213）乙烯砜抑制剂所抑制，表观IC₅₀为3.06 nM。使用¹²⁵I-LHVS-PhOH乙烯砜抑制剂进行的活性位点标记确认了p28、p31、p36和p40为组织蛋白酶样肽酶。对伊氏锥虫p40的部分纯化、其N末端肽段序列分析以及与抗布氏锥虫（Tbr）CATL抗血清的交叉反应性揭示了其与存在于布氏布氏锥虫（T. b. brucei）、克氏锥虫（T. cruzi）、迪奥氏锥虫（T. dionisii）和朗氏锥虫（T. rangeli）中的C1A CPs的直系同源关系。用泛组织蛋白酶不可逆抑制剂K11777（10 mg/天）连续治疗感染小鼠14天（n = 5）或17天（n = 3），具有杀锥虫作用并显著提高了小鼠存活率。这些结果验证了TevCATL作为治疗由伊氏锥虫引起的动物锥虫病的潜在治疗靶点。

动物锥虫病是热带和亚热带地区影响畜牧业的重要疾病，其中由伊氏锥虫引起的“苏拉病”（Surra）分布尤为广泛，可感染骆驼、马、犬等多种哺乳动物，造成显著的经济损失。在锥虫研究中，C1A半胱氨酸肽酶（CPs）被证实参与宿主-寄生虫相互作用、营养获取和免疫逃避，并已被提议作为抗锥虫药物靶点。然而，针对伊氏锥虫CPs的分子特征和药物靶点验证尚不充分。为此，研究人员以委内瑞拉水豚来源的伊氏锥虫株（TeAp-ElFrío01）为对象，系统鉴定了其半胱氨酸肽酶，并在小鼠感染模型中评估了不可逆泛组织蛋白酶抑制剂K11777的治疗潜力。该研究发表于《Pathogens》。

研究人员采用了多项关键技术：利用明胶酶谱法和类特异性抑制剂鉴定肽酶类别；通过荧光底物（如Z-Phe-Arg-AMC）测定底物偏好和抑制剂效力；使用放射性活性位点探针¹²⁵I-LHVS-PhOH标记活性肽酶；通过MonoQ-FPLC层析纯化p40并进行Edman N端测序；在BALB/c小鼠感染模型中开展K11777体内药效学评价，寄生虫来源为委内瑞拉株TeAp-ElFrío01，经Sprague-Dawley