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抗原结合增强型二价纳米抗体免疫磁分离联用ATP生物发光法检测活沙门氏菌
《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Antigen-binding-enhanced divalent nanobody-based immunomagnetic separation coupled with ATP bioluminescence for viable Salmonella detection
【字体： 大 中 小 】 时间：2026年09月09日 来源：ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY 4.1
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摘要目前，沙门氏菌的检测方法耗时长，或无法有效区分活菌与死细胞，限制了其在食品安全监测中的实际应用。因此，本研究优化表达了抗原结合增强的沙门氏菌双价纳米抗体（diVHH），并将其与磁珠（MBs）进行化学偶联。结合ATP生物发光技术，开发了一种快速检测活沙门氏菌的新策略。原核表
目前，沙门氏菌的检测方法耗时长，或无法有效区分活菌与死细胞，限制了其在食品安全监测中的实际应用。因此，本研究优化表达了抗原结合增强的沙门氏菌双价纳米抗体（diVHH），并将其与磁珠（MBs）进行化学偶联。结合ATP生物发光技术，开发了一种快速检测活沙门氏菌的新策略。原核表达体系的优化显著提高了diVHH的表达量，提升了约2.96倍。随后，经diVHH功能化的磁珠对多种受试沙门氏菌血清型的捕获效率超过90%。通过将免疫磁分离与ATP生物发光相结合，所建立的检测方法线性检测范围为102至106 CFU/mL，对肠炎沙门氏菌（S. Enteritidis）的检测限为10 CFU/mL，对鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium）的检测限为12 CFU/mL。整个检测过程可在2小时内完成。在加标食品样品中，该方法获得了96.00–106.89%的良好回收率，变异系数较低（0.78–7.54%）。值得注意的是，该方法可成功应用于环境和食品样品中多种沙门氏菌血清型的半定量分析，所得结果与平板计数法高度一致。本研究表明，工程化的diVHH表现出增强的抗原结合能力，可作为选择性沙门氏菌检测的优秀识别试剂，从而实现活沙门氏菌的可靠快速检测，具有广阔的应用前景。
目前，沙门氏菌的检测方法耗时长，或无法有效区分活菌与死细胞，限制了其在食品安全监测中的实际应用。因此，本研究优化表达了抗原结合增强的沙门氏菌双价纳米抗体（diVHH），并将其与磁珠（MBs）进行化学偶联。结合ATP生物发光技术，开发了一种快速检测活沙门氏菌的新策略。原核表达体系的优化显著提高了diVHH的表达量，提升了约2.96倍。随后，经diVHH功能化的磁珠对多种受试沙门氏菌血清型的捕获效率超过90%。通过将免疫磁分离与ATP生物发光相结合，所建立的检测方法线性检测范围为102至106 CFU/mL，对肠炎沙门氏菌（S. Enteritidis）的检测限为10 CFU/mL，对鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium）的检测限为12 CFU/mL。整个检测过程可在2小时内完成。在加标食品样品中，该方法获得了96.00–106.89%的良好回收率，变异系数较低（0.78–7.54%）。值得注意的是，该方法可成功应用于环境和食品样品中多种沙门氏菌血清型的半定量分析，所得结果与平板计数法高度一致。本研究表明，工程化的diVHH表现出增强的抗原结合能力，可作为选择性沙门氏菌检测的优秀识别试剂，从而实现活沙门氏菌的可靠快速检测，具有广阔的应用前景。
