特色应用
这些发现不仅证明了pYGAL1-Sed1p-eGFP-C系统在酵母表面展示异源蛋白方面的实用价值，还为未来酵母表面展示（YSD）的优化提供了可操作的指导方案。
摘要
酵母表面展示（YSD）是蛋白质工程的一项强大工具，但其更广泛的应用往往受到展示效率不理想的限制。为此，我们系统研究了三个关键遗传决定因素——启动子强度、锚定蛋白身份和融合方向（N端或C端）——对酿酒酵母（S. cerevisiae）中增强型绿色荧光蛋白（eGFP）表面展示水平的影响。我们构建了一个由重组酵母菌株组成的文库，每个菌株携带这些元件的不同组合，并通过基于荧光光谱分析的方法定量评估了它们的展示效率。我们的结果表明，所有三个参数的协同优化对于最大化YSD性能至关重要。在所测试的所有构建体中，新型质粒系统pYGAL1-Sed1p-eGFP-C——结合了强诱导型GAL1启动子、Sed1p细胞壁锚定蛋白以及C端eGFP融合——展现了最高的展示效率。该最佳构型实现了平均荧光强度比基准系统（pYSED1-Aga1p-eGFP-C）高出10.3倍以上，比替代的N端融合设计（pYSED1-eGFP-Aga1p-N）高出9.5倍。这些发现为构建高效YSD平台确立了一个明确的设计原则。pYGAL1-Sed1p-eGFP-C系统不仅提供了一个稳健且高效的eGFP展示底盘，还作为酵母表面呈现多种异源蛋白的多功能支架具有重要潜力，从而拓展了YSD在生物技术和合成生物学中的应用。
