《American Journal of Transplantation》：Characterising Prognostic Complement Biomarkers During Clinical Normothermic Machine Perfusion for Renal Transplantation
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补体在临床肾脏常温机械灌注（normothermic machine perfusion, NMP）期间的激活特征尚不清楚。研究人员检测了延长NMP期间灌流液补体生物标志物是否与早期移植物恢复相关。样本和结局数据来自移植前延长肾脏NMP的NKP1 1期试验（n
补体在临床肾脏常温机械灌注（normothermic machine perfusion, NMP）期间的激活特征尚不清楚。研究人员检测了延长NMP期间灌流液补体生物标志物是否与早期移植物恢复相关。样本和结局数据来自移植前延长肾脏NMP的NKP1 1期试验（n=36）。在灌注第1小时（Hour 1）和灌注结束时检测灌流液中C1s、collectin-11（CL-11）、C2、C3、C3d、factor B（FB）、Ba和可溶性C5b-9（soluble C5b-9, sC5b-9）。使用非参数检验、Kaplan–Meier分析和纳入英国供者风险指数（UK donor risk index, UKDRI）的Cox模型，评估其与功能性延迟移植物功能（functional delayed graft function, fDGF）和血清肌酐下降50%时间（time to 50% fall in serum creatinine, TCr50）的关联。灌注前和再灌注后配对活检行C4d、C5b-9和ICAM-1多重免疫荧光。C1s、CL-11、C3d和sC5b-9在NMP期间升高，而C2和FB降低。发生fDGF的肾脏灌注结束时sC5b-9和第1小时C3更高，经错误发现率校正后仍显著。补体谱可分层TCr50，包括在UKDRI层内；第1小时分组使Cox模型拟合优于单独UKDRI。再灌注后组织C5b-9和ICAM-1升高，C4d未升高。延长NMP期间补体激活与早期移植物结局相关，可支持生物标志物导向评估和未来靶向干预。
研究背景方面， deceased-donor kidney transplantation（死亡供者肾移植）中，normothermic machine perfusion（NMP，常温机械灌注）可在37 °C维持肾脏体外功能状态，但多数临床经验为短时间灌注，限制了其在物流、器官评估和体外治疗递送中的价值。已发表随机试验显示1小时NMP或2小时NMP未见明确临床获益，提示短时长暴露可能不足。prolonged NMP（延长NMP）的理论价值在于提供动态平台，用于连续移植物评估、生物标志物测量和ex-situ therapeutic intervention（体外治疗干预）。肝脏是循环补体蛋白主要来源，但kidney（肾脏）是公认肝外补体产生部位，human renal cells（人肾细胞）尤其proximal tubular epithelial cells（近端小管上皮细胞）可合成C2、C3、C4和Factor B等，并在缺血、炎症或损伤时上调。延长NMP使肾脏脱离正常循环补体环境，却承受缺血再灌注样应激，是独特生物学场景。已有人类废弃肾6小时NMP及猪全血灌注研究证明可检测到补体激活，但样本小、非移植器官、补体面板有限。因此，研究人员在NKP1试验中开展探索性早期生物标志物研究，表征延长临床NMP中灌流液与组织补体标记，并分析其与早期移植结局关系。
该论文发表于《American Journal of Transplantation》。研究人员开展的是NKP1单中心、1期、非随机、历史对照试验框架下的补体生物标志物研究，纳入36个接受移植前延长NMP的肾脏，结论为延长临床肾NMP伴随可测补体激活，早期和结束灌注补体谱与fDGF及移植物恢复速度相关，可能提供超出donor-risk index（供者风险指数）的信息，再灌注后C5b-9和ICAM-1增加支持生物学相关性，补体既可反映pre-NMP graft injury（NMP前移植物损伤）也可作为后续reperfusion injury（再灌注损伤）的合理参与者。
主要关键技术方法方面，研究基于NKP1试验队列：20个DBD（donation after brain death，脑死亡后捐献）和16个DCD（donation after circulatory death，循环死亡后捐献）肾脏，中位供者年龄56.5岁，中位UKDRI 1.35，预NMP冷缺血时间中位数8.57小时，按6、12、24小时三阶段入组各12例，在OrganOx Metra-K原型设备37 °C压力控制管路灌注。方法包括灌流液补体蛋白商用抗体检测、非参数统计与错误发现率校正、fDGF二分类终点、TCr50时间事件Kaplan–Meier与Cox模型、UKDRI分层、Cell DIVE平台multiplex immunofluorescence（多重免疫荧光）分析配对活检C4d/C5b-9/ICAM-1。
研究结果部分，The perfusion cohort（灌注队列）显示Hour 1 sC5b-9在DCD高于DBD，结束灌注C3d与UKDRI和供者年龄正相关。Perfusate complement dynamics during prolonged NMP（延长NMP期间灌流液补体动力学）通过配对Wilcoxon符号秩检验比较Hour 1与结束灌注浓度，得出C1s从360 ng/mL升至563 ng/mL、sC5b-9从379 ng/mL升至1004 ng/mL，CL-11与C3d小幅升高，C2和Factor B下降，C3和Ba无队列水平显著变化，说明存在激活片段累积与上路成分消耗。Perfusate complement markers and functional delayed graft function（灌流液补体标记与功能性延迟移植物功能）通过Wilcoxon秩和检验与错误发现率校正，得出结束灌注sC5b-9和Hour 1 C3在fDGF组更高且校正后显著，Hour 1 sC5b-9、sC5b-9增幅、结束C3d、Hour 1 Ba为名义关联，术后LDH与C3/C3d也一致关联损伤。Stratification by TCr50, UKDRI & Cox Regression（按TCr50、UKDRI和Cox回归分层）通过Kaplan–Meier、log-rank及Cox模型，得出UKDRI强分层恢复，结束C5b-9+C3d、Hour 1 C3+sC5b-9、Hour 1四标记组合（Ba/C3/sC5b-9/C3d）均分层TCr50，且在低/高UKDRI亚组均显著；Cox中加Hour 1补体组合比单独UKDRI的AIC更低、C-index更好、似然比显著，说明早期补体谱提供增量预后信息。Tissue Expression Pre-NMP & Post Recipient Reperfusion（NMP前与受者再灌注后组织表达）通过配对多重免疫荧光，得出组织C5b-9从0.017%升至0.119%、ICAM-1从0.727%升至1.011%，C4d无显著变化，提示再灌注后terminal pathway deposition（终末途径沉积）和内皮激活增强。
讨论部分总结，研究人员指出NMP期间C3d累积与C2/FB消耗共同支持ongoing complement activation（持续补体激活），而非单纯灌流液浓度效应；不同标记升降方向不一支持激活、消耗、washout（洗脱）和释放并存。Circuit artefact（管路假象）被驳斥：空白管路灌注补体激活低于含肾灌注10%，且补体标记与fDGF、TCr50等临床结局相关。Hour 1信号反映donor and retrieval biology（供者与获取生物学）及缺血再灌注诱导的肾内补体表达，是antecedent graft injury（先前移植物损伤）和innate immune priming（先天免疫致敏）的整合读出。补体在NMP中兼具marker和mediator角色：早期反映供者生理与获取损伤，后期终末途径激活可促成endothelial activation（内皮激活）与microvascular dysfunction（微血管功能障碍）。组织C5b-9和ICAM-1升高、C4d不变，说明post-reperfusion phenotype（再灌注后表型）以终末补体沉积与内皮激活为主，C4d更适于antibody-mediated injury（抗体介导损伤）而非普通IRI。临床含义是可利用早期补体谱在设备上做graft assessment（移植物评估）并筛选high-activation kidneys（高激活肾脏）用于pathway-directed treatment（途径导向治疗），如local C1-INH、C3b inhibition；局限是探索性post-hoc分析、样本小、终点时间异质、补体来源不能精确区分、不能证因果、模型非验证工具。
结论部分翻译：总之，延长临床肾NMP伴随可测补体激活，包括激活产物和终末途径标记累积。早期与结束灌注补体谱与fDGF及移植物恢复速度相关，并可提供超出供者风险指数的信息。再灌注后C5b-9和ICAM-1升高进一步支持生物学相关性。因此，补体既可作NMP前移植物损伤的读出，也是后续再灌注损伤的合理贡献者，支持进一步生物标志物与治疗研究。
