使用前鞭毛体优化体外抗克氏锥虫活性药物筛选实验

《Biology Methods and Protocols》：Optimization of an in vitro drug screening assay for anti-Trypanosoma cruzi activity using epimastigotes

　　《摘要》恰加斯病由克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起，对全球健康构成重大负担。目前治疗仅依赖苯硝唑和尼氟脲咪，二者疗效有限且不良反应显著。基于体外表型的药物筛选有助于发现替代治疗方案。虽然前鞭毛体（epimastigote）筛选模型不适用于初级药物发现，但可为化合物评估提供有价值的补充数据。然而，各研究间实验条件缺乏标准化，损害了结果的可重复性和实验室间的可比性。本文优化了克氏锥虫前鞭毛体药物敏感性检测的实验条件。在系统化变化的条件下培养克氏锥虫前鞭毛体（Y株），对培养基成分、血清补充量、换液频率、接种密度和治疗暴露时间进行优化。前鞭毛体生长在第8天达到峰值，此后开始下降。初始寄生虫接种量过低时生长减缓且变异性大，而寄生虫密度过高则形成聚集体。不同培养基间生长速率相近，但罗氏培养基（RPMI）可能促进类似前鞭毛体的形态出现。胎牛血清（FBS）可增强生长速率，血清浓度与增殖之间呈正相关。每三天更换一次培养基可保持前鞭毛体比例>98%。在优化条件下，苯硝唑的IC??为16.61 ± 0.38 μM。最佳条件包括：肝浸液胰蛋白酶培养基或脑心浸液培养基，含10%胎牛血清，每三天换液一次，接种密度为1×10? 虫体/mL，28°C下处理72小时。该检测方法在不同微孔板设计间表现出稳健性，在U形底和平底96孔板中均能产生一致结果。在优化条件下，苯硝唑可作为有效的阳性对照。