《Frontiers in Immunology》：Adaptive resilience: agarikon mycelium modulates immune responses and provides oxidative stress buffering in human immune cells
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摘要
背景：Agarikon（药用拟层孔菌 *Fomitopsis officinalis*，同物异名 *Laricifomes officinalis*）是一种在许多文化中具有数千年传统使用历史的真菌，现代研究支持其菌丝体和子实体具有抗微生物、抗病毒、抗癌
摘要
背景：Agarikon（药用拟层孔菌 *Fomitopsis officinalis*，同物异名 *Laricifomes officinalis*）是一种在许多文化中具有数千年传统使用历史的真菌，现代研究支持其菌丝体和子实体具有抗微生物、抗病毒、抗癌、抗氧化和免疫调节特性。由于agarikon子实体生长缓慢且栖息于原始森林，其菌丝体代表了一种易于培养的免疫调节和应激缓冲制剂，近期针对agarikon与云芝（*Trametes versicolor*）菌丝体混合制剂的临床试验也强调了这一点。
方法：为了为观察到的agarikon菌丝体支持的临床前和临床效应提供更强的机制基础，本临床前研究探讨了在人外周血单个核细胞（PBMCs）基础及脂多糖（LPS）刺激条件下，agarikon菌丝体的转录组效应（校正后p值padj < 0.05），同时评估了抗氧化、铁螯合和激酶结合活性（p < 0.05）。还评估了两种agarikon组分对细胞活力、增殖及特定细胞因子靶标诱导的影响（p < 0.05）。
结果：在基础条件下，agarikon菌丝体通过IL-1和NF-κB轴选择性参与先天免疫反应，同时伴随抗炎介质（如IL-1RA）增加和Toll样受体转录本减少而保持平衡。在LPS刺激条件下，这种先天免疫反应被修饰，检测到免疫效应因子（包括TLR5）的升高以响应诱导的应激，同时伴随可过度刺激免疫系统的细胞因子通路转录本减少。
结论：总体而言，agarikon菌丝体表现出协调的、上下文依赖的免疫反应谱，支持其应激缓冲和免疫调节潜力，值得继续进行临床验证。
**论文解读：agarikon菌丝体的免疫调节与氧化应激缓冲作用**
本文发表于《Frontiers in Immunology》，题为“Adaptive resilience: agarikon mycelium modulates immune responses and provides oxidative stress buffering in human immune cells”。
**一、研究背景与目的**
Agarikon（*Fomitopsis officinalis*，同物异名 *Laricifomes officinalis*）是一种具有数千年传统药用历史的真菌，现代研究已证实其菌丝体和子实体具有抗微生物、抗病毒、抗癌、抗氧化及免疫调节活性。然而，agarikon子实体生长缓慢、栖息地局限于原始森林，已被列入IUCN濒危物种红色名录。因此，可培养的菌丝体成为可持续获得其生物活性的替代途径。尽管已有临床前研究和临床尝试，但agarikon菌丝体免疫调节的分子机制仍不清楚。本研究旨在利用人外周血单个核细胞（PBMC）模型，通过转录组学与功能性实验，系统表征菌丝体在静息和脂多糖（LPS）刺激条件下的免疫调节和应激缓冲作用。
**二、技术方法概述**
研究人员以标准人PBMC为体外模型，制备了乙醇（EtOH）和乙酸乙酯（EtOAc）两种agarikon菌丝体提取物。首先采用MTT法和荧光CyQUANT法评估细胞活力与增殖；随后对处理后的PBMC进行mRNA测序（RNA-Seq），利用DESeq2分析差异表达基因（DEG）及富集通路（p
adj<0.05）；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）验证白细胞介素-8（IL-8）、IL-1受体拮抗剂（IL-1RA）和IL-1α蛋白水平；通过DPPH自由基清除和亚铁离子螯合实验测定抗氧化活性；利用KINOMEscan竞争性结合实验检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）结合；并用中性红和细胞病变效应（CPE）实验评估抗流感A病毒活性。研究未涉及临床样本队列。
**三、研究结果**
**1. Agarikon菌丝体促进细胞代谢活性和增殖**
MTT实验显示，EtOH提取物在最低五个浓度下使PBMC活力显著增加至少20%，而EtOAc提取物仅维持活力。荧光增殖实验表明，EtOH组分在基础和LPS刺激条件下均显著促进细胞增殖。
**2. 上下文依赖的转录组免疫与应激反应特征**
主成分分析显示，agarikon处理样本与对照组明显分离。基础条件下，351个基因上调、184个下调；LPS条件下，437个上调、181个下调。通路富集分析显示，基础条件下主要涉及脱颗粒、Toll样受体（TLR）和白细胞介素信号、抗氧化/解毒通路；LPS刺激后，则集中于细胞因子/TLR信号和脱颗粒，同时保留抗氧化和抗炎信号。基础条件下，IL8、IL1RN、IL1B、SOD2等上调，TLR4、TLR7和CD14下调；LPS条件下，TLR5、IL1A和多种CD分子上调，但幅度低于基础条件，而IL18和非经典NF-κB亚基NFKB2、RELB下调。与基础条件相比，LPS刺激后的IL8转录响应低约十倍，IL-1RA也显著降低，提示应答具有条件依赖性。
**3. Agarikon菌丝体的抗氧化能力**
DPPH实验显示，菌丝体提取物在水和乙醇中均呈剂量和时间依赖的自由基清除活性，大部分活性在30分钟内完成，乙醇重悬时活性更高。亚铁离子螯合实验也显示剂量依赖性，最高浓度时螯合能力约为最低浓度的四倍。
**4. 细胞因子调节和次级免疫信号**
ELISA结果证实，基础条件下EtOH和EtOAc提取物均显著诱导IL-1RA蛋白产生；LPS条件下，EtOH提取物使IL-1α蛋白小幅度增加，而EtOAc提取物使其小幅度减少。IL-8蛋白水平未随转录上调而大幅升高。KINOMEscan中，EtOAc提取物对JNK3和TRKA激酶表现出中等且浓度依赖的结合活性。
**5. 抗流感A病毒活性**
该agarikon菌株在Project BioShield筛选中对流感A（H3N2）表现出显著抗病毒活性。在中性红和CPE实验中，选择性指数（SI）达260以上，并超过阳性对照药利巴韦林。
**四、讨论与结论**
讨论部分指出，在基础条件下，agarikon菌丝体同时激活免疫和抗炎/抗氧化通路，形成一种免疫缓冲状态。例如，TLR4/7下调与IL-1RA高表达有助于避免过度炎症；转录水平IL8升高而蛋白水平未明显升高，提示免疫预备而非促炎激活。LPS刺激后，免疫效应分子适当上调（如TLR5、IL1A），同时伴有SOCS下调、非经典NF-κB抑制和抗氧化酶上调，表明在免疫激活的同时维持氧化还原平衡。这些机制与既往报道的子实体NF-κB调节作用一致，并得到抗病毒试验支持。研究还存在局限性，如多数转录组发现尚未在蛋白/通路层面实现机制验证，提取物活性成分也未完全解析。
研究结论认为，尽管agarikon有数千年传统使用和现代临床应用，其免疫机制尚未完全明确。本研究基于子实体已知发现，证明了agarikon菌丝体引发协调的免疫调节效应，为含agarikon的单一或混合制剂的临床前和临床研究提供了机制背景，并支持其作用模式（如IL-1轴调节）的假说。虽然菌丝体和子实体具有重叠又有区别的生物效应，本研究进一步支持基于菌丝体的免疫缓冲能力，并强调了与子实体发现的共同点——包括NF-κB信号的参与。鉴于agarikon的濒危状态，菌丝体培养提供了可扩展且可持续利用其生物活性潜力的途径。总之，这些发现支持agarikon在应激条件下促进适应性韧性的作用，其特征为协调的免疫调节活性、抗病毒活性和氧化还原平衡的维持。
