罗非鱼传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）实时聚合酶链反应（PCR）与比色环介导等温扩增（LAMP）检测方法的开发与比较评估

《BMC Research Notes》：Development and comparative evaluation of real-time PCR and colorimetric loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assays for the detection of infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV) in tilapia

　　传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）是一种高致死性病原体，对全球水产养殖业构成重大威胁。ISKNV最近在非洲大陆的出现对罗非鱼产业造成了毁灭性打击。迫切需要对当地条件具有适配性的快速、灵敏且可在现场应用的诊断工具。本研究开发并评估了一种基于SYBR Green的实时定量PCR（qPCR）方法，以及一种改良的比色环介导等温扩增（LAMP）检测法，并与参考多重常规PCR（mPCR）方法就灵敏度、特异性、精密性和诊断适用性进行了比较。两种检测方法对感染BF-2细胞系和鱼类组织样本中的ISKNV检测均具有特异性。LAMP检测法表现出最高的分析灵敏度，在本研究所用实验条件下，其检测限（LOD）约为17个病毒拷贝/μL。该检测法还能从无预核酸提取步骤的粗组织匀浆中快速检出病毒，表明其具有用于现场诊断的潜力。qPCR检测法的灵敏度高出十倍，检测限为67个病毒拷贝/μL，其灵敏度仍足以支持其在实验室诊断和暴发调查期间流行病学监测中的应用。总体而言，这些检测方法为在资源有限地区进行ISKNV检测和监测提供了互补的分子工具，有待更广泛的诊断验证。