《Journal of Virology》：BTX-A51 treatment modulates host innate immune responses via NF-κB and β-catenin signaling during Rift Valley fever virus infection in vitro
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裂谷热病毒（Rift Valley fever virus, RVFV）是一种人畜共患的蚊媒出血性病原体，具有高流行潜力，在非洲大多数国家流行。该病毒最严重地导致小型家养反刍动物发病，并可传播给人类。世界卫生组织已将RVFV列为疫苗和治疗开发的优先病原体。已知
裂谷热病毒（Rift Valley fever virus, RVFV）是一种人畜共患的蚊媒出血性病原体，具有高流行潜力，在非洲大多数国家流行。该病毒最严重地导致小型家养反刍动物发病，并可传播给人类。世界卫生组织已将RVFV列为疫苗和治疗开发的优先病原体。已知该病毒暴发会对当地社区的经济、农业、粮食供应和医疗保健系统造成重大干扰。目前尚无美国FDA批准的疫苗或治疗药物用于预防或治疗RVFV。在此，研究人员使用BTX-A51（一种抗癌药物和酪蛋白激酶-1（casein kinase-1, CK1）抑制剂）作为药理学工具，探讨CK1在RVFV感染过程中调节先天免疫信号传导的作用。结果表明，通过BTX-A51抑制CK1可阻断级联反应中需要CK1磷酸化才能推进信号传递的不同步骤，从而抑制NF-κB介导的信号传导。因此，这减少了p65向细胞核的转位以及促炎细胞因子和酶的转录激活。此外，BTX-A51处理影响了β-catenin通路，导致β-catenin蛋白水平显著增加，并促进β-catenin与p65的共定位。延迟BTX-A51处理仍能保持其对细胞因子基因表达的影响，并部分挽救RVFV诱导的细胞死亡。这些数据表明，CK1抑制既影响RVFV复制，也影响宿主先天免疫信号传导，提示在RVFV感染期间NF-κB和β-catenin通路之间存在关联。这些发现将CK1介导的信号传导确定为一个潜在的宿主导向治疗靶点，旨在限制病毒诱导的过度炎症。
裂谷热病毒（RVFV）是一种蚊媒人畜共患病原体，对反刍动物和人类健康构成严重威胁，被世界卫生组织（WHO）列为优先病原体，但目前缺乏美国FDA批准的疫苗或治疗药物。病毒感染常导致过度炎症反应，造成肝损伤和神经疾病。宿主激酶酪蛋白激酶1（CK1）参与多种细胞信号通路，包括NF-κB和β-catenin通路。先前研究已发现CK1可磷酸化RVFV L蛋白，其抑制剂D4476可降低病毒复制，但D4476未进入临床。因此，本研究采用已进入临床试验的CK1抑制剂BTX-A51，探讨CK1在RVFV感染中对宿主先天免疫信号调控的作用，并为宿主导向治疗提供依据。
研究人员使用了人小气道上皮细胞（HSAECs）、肝癌细胞（Huh7）和神经母细胞瘤细胞（SK-N-SH）等模型，分别以RVFV疫苗株rMP12和致病株ZH501感染。通过细胞活力测定、空斑实验、RT-qPCR、Western blot、免疫荧光成像（包括宽场和共聚焦显微镜）以及Pearson共定位分析，评估病毒复制、NF-κB和β-catenin通路相关蛋白和基因表达的变化。样本来源方面，HSAECs购自Cambrex，Vero和SK-N-SH等来自ATCC，ZH501由美国CDC提供。
在细胞毒性实验中，BTX-A51在HSAECs、Huh7和SK-N-SH细胞中的安全浓度确定为≤20 μM（细胞活力≥80%）。随后在RVFV感染模型中，BTX-A51处理显著降低了病毒滴度和病毒RNA水平，表明其具有抗病毒活性。Western blot分析显示，BTX-A51处理降低了IκBα的磷酸化（S32/S36）、p65的S316磷酸化以及总p65蛋白水平，同时p65基因表达在24 hpi显著下降。免疫荧光实验表明，RVFV感染后DMSO处理的细胞p65核转位增加，而BTX-A51处理使p65更多保留在细胞质，核/质比降低。RT-qPCR结果显示，BTX-A51显著抑制了RVFV诱导的CXCL10、TNF、IL6等细胞因子表达，并降低了NOS2和PTGS2酶基因的表达；但IFNA1表达不受抑制，而IFNB1被降低。Western blot显示BTX-A51显著降低β-catenin的S45磷酸化，同时总β-catenin水平升高，并伴随GSK-3β S9磷酸化降低，提示β-catenin降解被抑制。免疫荧光显示BTX-A51处理后总β-catenin信号增强，但核定位减少，主要保留在细胞质。RT-qPCR表明，BTX-A51显著抑制了MYC、CCND1和AXIN2的基因表达。共聚焦显微镜和Pearson系数显示，在RVFV感染且BTX-A51处理的细胞中，p65与β-catenin显著共定位，尤其是核内，提示β-catenin可能通过蛋白相互作用抑制NF-κB信号。在16 hpi开始BTX-A51处理的实验显示，仍能抑制细胞因子基因表达，并在HSAECs和Huh7细胞中显著提高48 hpi的细胞存活率。
讨论部分总结了BTX-A51通过抑制CK1同时影响NF-κB和β-catenin通路，从而降低促炎信号。机制上，BTX-A51抑制IκBα磷酸化、p65 S316磷酸化及p65核转位，同时导致β-catenin积累并滞留于细胞质，且与p65共定位，可能通过非转录方式抑制NF-κB活性。此外，BTX-A51还对CDK7/CDK9有抑制作用，但实验显示部分基因（如IFNA1）未被下调，排除全局转录抑制。细胞活力测定显示BTX-A51主要产生细胞静止效应而非直接细胞毒性。局限性包括缺乏体内数据以及IFNB1下调可能削弱抗病毒防御。未来需优化剂量和治疗窗口。结论部分指出，RVFV是布尼亚病毒目中最深入研究且被视为对策开发原型的病毒之一，但尚无FDA批准的治疗药物。本研究通过揭示CK1介导的信号通路在调节RVFV炎症反应中的关键作用，为BTX-A51作为宿主导向的免疫调节治疗提供了有力支持，其抑制CK1可限制病毒诱导的过度炎症并部分改善细胞活力，为应对RVFV及相关病毒的大流行防范提供了潜在策略。
