《Journal of Reproductive Immunology》：Inflammatory plasma transfer induces early ovarian CD8+ accumulation without overt pathology
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•被动炎性血浆转移触发早期卵巢CD8+T细胞聚集。•在短时间终点，卵巢结构在H&E染色下保持完好。•暴露于炎性血浆后CD8免疫反应性增强。•供体血浆表现出与炎症相关的卵巢靶向自身免疫反应性。•Rag1-/-卵巢结合支持抗体介导的组织靶向。引言卵巢是一个免疫学上独特的器官。它必
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被动炎性血浆转移触发早期卵巢CD8+T细胞聚集。
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在短时间终点，卵巢结构在H&E染色下保持完好。
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暴露于炎性血浆后CD8免疫反应性增强。
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供体血浆表现出与炎症相关的卵巢靶向自身免疫反应性。
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Rag1-/-卵巢结合支持抗体介导的组织靶向。
引言
卵巢是一个免疫学上独特的器官。它必须在支持反复的组织重塑周期、与排卵相关的炎症以及内分泌驱动的分化的同时，维持免疫抑制以避免损伤卵泡储备（Duffy et al. 2019）。当这种免疫抑制失效时，卵巢炎症便会发生，进而导致卵巢功能障碍，引起不孕症、原发性卵巢功能不全（POI）以及全身性炎症性疾病。在这些疾病中，自身免疫特征反复被涉及，包括淋巴性卵巢炎和循环抗卵巢抗体（Chen et al., 2022, Kirshenbaum and Orvieto, 2019, Eikmans et al., 2022）。然而，该领域持续存在的一个空白是时序和因果关系问题——全身免疫信号究竟是仅仅反映疾病，还是能够在明显的病理出现之前主动启动靶向卵巢的免疫变化？这个问题至关重要，因为自身免疫性疾病通常通过一个临床前期演变，在该阶段免疫重塑和自身抗体在经典终末器官损伤建立之前即可被检测到（Frazzei et al., 2022, Pisetsky, 2023）。在生殖免疫学中，这一临床前期窗口具有重要的临床意义，因为在诊断时卵巢损伤可能已不可逆转（Kaplan and Stephen, 2004）。自身免疫性卵巢功能障碍总体上缺乏可靠的生物标志物来区分良性自身反应性和致病性免疫参与，卵巢炎和卵巢自身抗体可在缺乏明确、即时的病程预测的情况下发生（Szeliga et al., 2021, Kirshenbaum and Orvieto, 2019）。因此，确定与卵巢相关的、先于组织损伤的早期免疫变化，是迈向机制理解和临床转化的切实步骤。
干扰素-γ（IFN-γ）是全身自身免疫背景下早期免疫变化的有力候选驱动因子。以持续IFN-γ为特征的炎症可促进内皮细胞活化、趋化因子程序和T细胞募集，包括在非淋巴组织内的CD8+T细胞募集（Ley and Kansas, 2004, Khan et al., 2016, Hardardottir et al., 2021）。ARE-Del小鼠模型是通过删除Ifng转录本3′ UTR中的AU富含元件（AU-rich element）产生的，该模型表现出慢性循环IFN-γ升高和狼疮样免疫异常（Hodge et al., 2014, Bafor et al., 2024），提供了一个遗传学上明确的系统，其中全身细胞因子失调位于广泛免疫激活的上游。在我们使用ARE小鼠的先前工作中，我们表明IFN-γ升高与生殖功能障碍和生殖组织（包括卵巢）中CD8+T细胞浸润增加相关，并偏向效应/记忆表型（Bafor et al. 2024）。除IFN-γ外，ARE-/-小鼠还表现出持续升高的循环TNF-α、IL-6和IL-10，这些因子与下游生殖激素缺陷显著相关（Bafor et al. 2024），表明ARE-/-炎性微环境超越IFN-γ本身。这些发现支持一种模型，即全身炎症基调可与卵巢中的免疫重塑相关联，但尚未解决循环因子本身是否足以在否则健康的受者中启动这种重塑。CD8+T细胞被选为本研究的主要细胞读出指标，是因为我们先前的工作将其鉴定为ARE小鼠慢性IFN-γ升高在生殖组织中的主要免疫相关细胞，并明显偏向效应记忆表型（Bafor et al. 2024）。这为检测循环因子能否在否则健康的受者中重现这种特定细胞变化提供了可行的读出指标。
在这里，我们使用被动转移策略直接检验这一充分性问题。来自WT、ARE+/-或ARE-/-供体的混合血浆被给予年龄匹配的WT雌性受者，随后进行短期卵巢组织学、CD8相关免疫反应性和淋巴免疫组成的评估。同时，我们量化了供体中基因型依赖的循环卵巢自身反应性，并在Rag1-/-卵巢切片上绘制血浆结合模式，以评估在缺乏内源性适应性免疫的情况下，体液信号是否与基因型特异性卵巢靶向相一致。这一策略将三个相关但不同的免疫影响层面区分开来：(i) 是否诱导卵巢病理，(ii) 是否可检测到早期卵巢免疫变化，以及(iii) 全身体液自身反应性是否可能参与卵巢靶向的免疫参与。
总体而言，本研究将循环因子定位为病损前卵巢免疫变化的潜在上游触发因子。通过将CD8+T细胞相关早期聚集与短时间终点的明显H&E病理区分开来，并将供体基因型与循环卵巢自身反应性和组织结合模式联系起来，我们提供了一个框架，用于理解全身自身免疫如何可能在经典卵巢炎或卵泡后果在组织学上明显之前，就开始影响卵巢。
章节摘要
动物
所有实验均使用雌性小鼠。野生型（WT）小鼠（JAX品系#000664）和Rag1-/-小鼠（JAX品系#002096）背景为C57BL/6 J。具有慢性IFN-γ升高的ARE替换小鼠被用作杂合子（ARE+/-）和纯合子（ARE-/-）供体基因型（Hodge et al. 2014）。基因分型按补充方法中描述的方法进行。Rag1-/-小鼠被用作适应性免疫缺陷基质，用于卵巢组织结合实验。
小鼠饲养和繁殖于
被动血浆转移在8天后未重现明显卵巢组织病理
在我们对慢性IFN-γ升高的ARE小鼠的先前工作中，我们报道了卵巢CD8?T细胞浸润增加和与炎症微环境一致的生殖功能障碍，该微环境有能力驱动靶向组织的免疫病理（Bafor et al. 2024）。在本研究中，为检验循环因子是否足以启动卵巢组织损伤，来自接受混合WT、ARE+/-或ARE-/-血浆（100 μL腹腔注射，每日一次，连续3天）的WT受者的卵巢在第8天被采集并
讨论
本研究旨在回答循环免疫因子（在缺乏持续炎症或组织驻留疾病的情况下）是否启动了卵巢中先于明显组织病理的免疫变化。这个问题处于现代自身免疫生物学的核心，许多疾病现在被认为具有一个临床前期，在该阶段全身免疫活化和自身抗体在组织损伤变得明显之前、经典组织病理学之前就已出现
基金
本研究得到了国家癌症研究所癌症研究中心内部研究项目支持，包括癌症创新实验室（CIL; 1ZIABC009283-36）、尤妮斯·肯尼迪·施里弗国家儿童健康和人类发展研究所（NICHD; 1K99HD109370-01A1），以及自身免疫性疾病研究办公室内部奖项。本文所表达的观点为作者本人观点，不一定代表相关机构的官方观点或政策
CRediT作者贡献声明
Bafor Enitome: 写作 – 审阅与编辑，写作 – 初稿撰写，方法论，调查研究，基金获取，形式化分析，数据整理，概念构思。Young Howard A: 写作 – 审阅与编辑，监督，资源，基金获取。Olivier Duverger: 写作 – 审阅与编辑，方法论，调查研究。Toni Martin: 写作 – 审阅与编辑，调查研究，形式化分析。
致谢
作者感谢国家癌症研究所弗雷德里克分校实验动物科学项目的Adrienne Kimmel、Berta Hernandez和Loretta Smith在动物护理和部分实验方面的协助；感谢国家癌症研究所弗雷德里克分校分子组织病理学实验室的Baktiar Karim博士和Donna Butcher在组织病理学方面的协助。示意图由BioRender.com创建。
利益冲突声明
作者声明以下可能存在潜在利益冲突的财务利益/个人关系
Toni Martin|Olivier Duverger|Howard A. Young|Enitome E. Bafor
