《Frontiers in Cellular and Infection Microbiology》：Impact of clinical sample processing time on the performance and T-cell response of the T-SPOT.TB assay
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目的：T-SPOT.TB是一种用于检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）感染的干扰素-γ释放试验（interferon-gamma release assay, IGRA），要求血液样本在4小时内进行处理，这限制了临床灵活性。
目的：T-SPOT.TB是一种用于检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）感染的干扰素-γ释放试验（interferon-gamma release assay, IGRA），要求血液样本在4小时内进行处理，这限制了临床灵活性。T-Cell Xtend?（TCX）可延长允许的储存时间但成本较高。研究人员在真实世界环境中评估了延迟处理对T-SPOT.TB一致性的影响。方法：前瞻性纳入接受T-SPOT.TB检测的门诊患者。样本分别在标准时间（≤4小时）、24小时延迟加TCX、以及24小时延迟不加TCX的条件下处理。连续两天的新鲜样本作为受试者内可重复性参考。结果：在443例患者中，282例接受了24小时延迟检测。与标准时间结果的一致性：不加TCX为93.3%（κ=0.859），加TCX为93.0%（κ=0.860），与新鲜样本可重复性（95.0%；κ=0.840；均p<0.001）相当。多因素分析识别出初始临界结果（OR=15.21, p<0.001）和24小时延迟（p<0.05）是T-SPOT.TB逆转的独立预测因素，与是否使用TCX无关。抗原孔斑点形成细胞（spot-forming cell, SFC）计数在24小时延迟后显著降低（p<0.001）；TCX未能缓解这一下降（p=1.000）。阳性对照SFC计数保持稳定（p=0.602）。结论：24小时处理延迟与标准时间的T-SPOT.TB结果具有高度一致性，支持其临床可行性。然而，临界结果和延迟处理与结果不一致独立相关，需谨慎的临床解读。
本研究发表于《Frontiers in Cellular and Infection Microbiology》，针对临床样本延迟处理对T-SPOT.TB检测性能及T细胞应答的影响进行了系统评估。
2024年全球新发结核病病例约1070万例，估算发病率达131/10万，中国在30个结核病高负担国家中位列第四，占全球发病数的6.5%。潜伏性结核感染（LTBI）是结核病新发病例的重要来源，因此筛查LTBI并开展预防性治疗是结核病控制的关键环节。T-SPOT.TB是基于酶联免疫斑点（ELISpot）法的干扰素-γ释放试验（IGRA），被世界卫生组织批准用于检测结核分枝杆菌感染。该方法通过计数经特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激后分泌干扰素-γ（IFN-γ）的T细胞斑点来判定结果。由于细胞免疫功能会随时间快速下降，试剂厂商要求采血后4小时内完成检测，这一限制使实验室难以批量处理样本，降低了人员和设备的利用效率。对于采血点与实验室距离较远或外部送检的机构，样本的及时运输更难保障。为解决该问题，厂商开发了T-Cell Xtend?（TCX）试剂，据称能将全血样品在10-25°C下储存至32小时而不影响检测准确性，但其成本较高，制约了常规应用。因此，研究人员在真实临床环境中比较了不同延迟条件（24小时延迟加或不加TCX）与标准时间（≤4小时）处理的效果，以评估延迟处理的可行性及TCX的实际价值。
研究人员纳入443例门诊患者，分为两个研究臂：前瞻性24小时延迟检测组282例（2024年3月至10月），其同一份血液样本分别进行标准时间处理、24小时延迟不加TCX处理（n=282），其中214例同时进行24小时延迟加TCX处理；新鲜样本检测组为历史重复检测队列161例（2012年12月至2024年3月），每个新采集样本均在4小时内处理，用于评估受试者内短期变异性。采用AID ELISpot自动读取仪计数斑点形成细胞（SFC），并严格按厂商判读标准划分反应性、非反应性和临界结果。统计分析包括配对t检验、Wilcoxon符号秩检验、McNemar检验、Cohen's κ一致性检验及多因素logistic回归。
研究结果显示：3.1 研究人群特征——443例患者中，男性占49.0%，平均年龄48±17岁；32.5%符合免疫介导炎症性疾病（IMID）诊断标准。共1100份有效标本纳入分析，延迟检测组中IMID比例（39.4%）高于新鲜样本组（20.5%）。3.2 不同临床处理时间下T-SPOT.TB结果一致性——在282例标准时间检测中，反应性占63.1%，非反应性占36.9%。24小时延迟不加TCX重测时，9.0%的反应性样本发生逆转，2.9%的非反应性样本发生转换，总一致性93.3%（κ=0.859）；加TCX延迟重测时，逆转率10.0%，转换率3.8%，总一致性93.0%（κ=0.860）。新鲜样本连续两天重测的总体一致性为95.0%（κ=0.840）。三种配对的一致性相当，且不一致模式均为逆转多于转换，提示延迟处理倾向于削弱抗原特异性反应。3.3 T-SPOT.TB结果不一致的影响因素——多因素logistic回归发现，初始临界结果（OR=15.21，95%CI：4.52-51.19）和24小时延迟处理（不加TCX：OR=5.28；加TCX：OR=5.03）是反应性逆转的独立预测因素；而重复检测时的临界结果（OR=23.12，95%CI：5.59-95.70）是非反应性转换的独立预测因素。性别、年龄和IMID状态与结果不一致无显著关联。3.4 不同临床处理时间下T-SPOT.TB免疫应答强度——在初始反应性患者中，24小时延迟后ESAT-6、CFP-10及总抗原特异性SFC计数均显著低于标准时间处理（均P<0.001），但加与不加TCX的延迟处理间SFC差异无统计学意义（P>0.05）。PHA阳性对照SFC在三种条件下保持稳定（P=0.602）。连续两天新鲜样本的SFC计数无显著变化（P>0.05），说明标准时间
