整体身心针灸调节激活瘦素受体-AMPK信号通路恢复慢性疲劳综合征线粒体稳态的体内外研究

《Chinese Journal of Integrative Medicine》：Holistic Regulation of Body–Mind Acupuncture Activates Leptin Receptor–AMPK Signaling to Restore Mitochondrial Homeostasis in Chronic Fatigue Syndrome in vitro and in vivo

　　摘要目的通过聚焦瘦素受体（LepR）–AMP激活蛋白激酶（AMPK）信号通路，阐明身心整体调节（HRBM）针刺疗法在慢性疲劳综合征（CFS）中的治疗机制，以解决线粒体功能障碍和氧化应激问题。方法采用4周跑步机力竭运动方案建立CFS大鼠模型。建模后，将50只大鼠随机分为5组（n=10）：对照组、CFS（模型）组、针刺（Acu）组、Acu+Allo-aca组、Acu+Allo-aca+5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷（AICAR）组。Acu组大鼠连续4周每日接受双侧百会（GV 20）和足三里（ST 36）针刺治疗，每次30分钟。采用行为学评估确认模型有效性和治疗效果。利用骨骼肌转录组学分析识别与线粒体代谢相关的差异表达基因。通过RT-qPCR和Western blot分析验证LepR、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）和核因子红细胞2相关因子2（Nrf2）的表达。体外实验以EX-527（1 μmol/L）和AICAR（500 μmol/L）处理慢性疲劳样细胞。采用JC-1法评估线粒体膜电位，定量测定细胞内ATP和活性氧（ROS）水平，并通过Western blot分析评估凋亡相关蛋白、抗氧化酶和线粒体自噬相关蛋白的表达。通过透射电子显微镜观察线粒体超微结构。采用免疫荧光和DCFH-DA探针评估LepR/AMPK共定位情况及ROS动态变化。结果百会（GV 20）和足三里（ST 36）针刺显著改善了CFS大鼠的疲劳相关行为和运动耐力。与对照组相比，CFS大鼠表现出明显加重的疲劳症状（P<0.01），而针刺治疗显著改善了这些缺陷（P=0.0015）。转录组学分析显示，针刺激活了LepR-AMPK信号通路，伴随线粒体功能增强、ATP产生增加和抗氧化能力提高。此外，针刺促进了PINK1/Parkin介导的线粒体自噬并稳定了线粒体超微结构。体外实验中，EX-527和/或AICAR处理改善了慢性疲劳样细胞模型的线粒体功能和代谢指标。结论HRBM针刺通过激活LepR–AMPK信号通路，恢复线粒体生物能学功能、增强抗氧化防御并促进线粒体自噬，从而在CFS中发挥治疗作用。