基于离心微旋过滤的MSF–koff检测方法用于SELEX后适配体候选分子解离动力学的高效预筛选

《Biosensors》：Retention-Based, Dissociation-Sensitive Pre-Screening of Aptamers Using a Centrifugal Microspin Filter

　　# 摘要在通过指数富集系统演化配体（SELEX）筛选后，适配体候选分子的高效评估仍然受到直接动力学表征所需时间和成本的限制。我们开发了一种基于离心微旋过滤（MSF）的MSF–k_off检测方法，用于对适配体候选分子进行基于保留率、对解离敏感的预筛选。反复洗涤可优先从靶标固定的磁珠上去除快速解离的适配体，保留的适配体通过定量聚合酶链反应进行定量，并以Wash 0归一化保留率（W0-NRT）表示。在凝血酶适配体组中，W0-NRT与基于SPR测得的k_off呈强负相关。对链霉亲和素适配体的初步分析同样显示，基于W0-NRT的排名与文献报道的k_off值一致，尽管两个靶标系统表现出不同的经验关系。在基于洗涤的凝血酶夹心检测中，两个亲和力匹配但在k_off上相差1.76倍的传感器适配体，在洗涤后保留率和W0-NRT中均呈现相同的排名顺序。这种一致性体现在排名顺序上，而非保留率的大小上。此外，并行微旋过滤格式在分析时间和检测相关成本方面也预计具有优势。因此，MSF–k_off检测为SELEX后提供了一种简便的方法，可在进行详细动力学表征之前，优先筛选出在对解离敏感的洗涤条件下具有更高保留率的候选分子。