微卫星不稳定性与CD8?肿瘤浸润淋巴细胞对结直肠癌新辅助化疗反应的影响：一项前瞻性观察性研究

《Cancer Management and Research》：The Impact of Microsatellite Instability and CD8+ Tumor Infiltrating Lymphocytes on Neoadjuvant Chemotherapy Response in Colorectal Cancer: A Prospective Observational Study

　　

摘要 背景 结直肠癌的治疗包括手术和化疗，随着个体化治疗方案的进展，治疗重点在于实现更安全、更有效的疗效。微卫星不稳定性（MSI）是结直肠癌发生发展的关键机制之一，而CD8?肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）属于对癌细胞具有显著作用的免疫细胞亚群。本研究旨在探讨MSI、CD8? TILs表达与化疗反应之间是否存在关联。 方法 本研究为一项回顾性队列研究，研究对象为印度尼西亚西爪哇一家三级综合医院中在肿瘤切除前接受新辅助化疗的结直肠癌患者。MSI检测采用qPCR-HRM法（BioColoMelt-Dx试剂盒），CD8? TILs表达采用免疫组织化学法检测。化疗反应采用实体瘤疗效评价标准（RECIST）进行评估。 结果 本研究共纳入41例受试者。其中3例（7.3%）存在微卫星不稳定性（1例MSI-L，2例MSI-H），19例（46.3%）表现为CD8? TILs高表达。28例（68.3%）为III期，其次为IV期（22%）和II期（9.8%）。10例（24%）出现疾病进展，16例（39%）CD8? TILs高表达者表现为部分化疗反应。MSI与年龄显著相关（P<0.05）。CD8? TILs表达与性别、组织学亚型、分化程度或肿瘤部位无显著关联，但与年龄、分期及化疗反应显著相关（P<0.05）。MSI受试者倾向于早发性疾病。与CD8? TILs低表达者相比，CD8? TILs高表达的结直肠癌患者发生转移（IV期）的可能性较低，且化疗反应更好。 结论 MSI状态与CD8? TILs之间无显著关联。CD8? TILs高表达的结直肠癌患者表现出更好的化疗反应和更佳的预后。

论文解读

一、研究背景与问题

结直肠癌是全球范围内导致死亡的主要恶性肿瘤之一，2022年全球新发病例约190万例，死亡约90万例。在印度尼西亚，结直肠癌位居常见癌症第四位，2022年新发病例35676例。近年来，随着生活方式西化，结直肠癌发病率持续上升。尽管筛查手段和治疗方案的进步使部分地区的发病率和死亡率有所下降，但晚期诊断仍然是临床面临的重大挑战。

结直肠癌的发生发展源于基因突变的逐渐累积，其中微卫星序列作为基因组中短串联重复DNA序列，在复制过程中特别容易发生错误，导致移码突变和蛋白质失活。正常情况下，错配修复（MMR）系统能够识别并纠正这些DNA损伤。然而，当MMR系统相关基因发生突变时，修复功能缺陷导致基因突变不断累积，形成微卫星不稳定性（MSI）。

在肿瘤免疫微环境中，CD8?肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）作为细胞毒性T细胞，能够通过识别肿瘤抗原并释放穿孔素和颗粒酶杀伤肿瘤细胞。已有研究表明，MSI肿瘤因移码突变产生新抗原，可刺激免疫细胞浸润，从而增强免疫监视、限制转移潜能，并与更好的临床预后相关。然而，关于MSI状态与CD8? TILs表达之间的关联及其对化疗反应的预测价值，不同研究结果尚不一致，尤其缺乏来自东南亚人群的数据。

基于上述背景，研究人员开展了一项回顾性观察性研究，旨在评估MSI状态和CD8? TILs表达与结直肠癌患者新辅助化疗反应之间的关系，以期为个体化治疗提供依据。该论文发表于《Cancer Management and Research》。

二、主要技术方法

本研究采用回顾性观察性设计，遵循STROBE指南，在印度尼西亚西爪哇Hasan Sadikin综合医院消化外科开展，纳入2024年7月至2025年6月期间就诊的结直肠癌患者。纳入标准包括：病历资料完整、年龄≥18岁、在同一医院完成化疗、知情同意；排除标准包括I期疾病、有其他恶性肿瘤史、化疗中断、失访、化疗前已接受根治性肿瘤切除以及接受放疗的直肠癌患者。最终共41例受试者入组。

MSI检测采用BioColoMelt-Dx试剂盒进行qPCR-HRM分析，针对BAT-25、BAT-26、MONO-27、NR-21和NR-24五个单核苷酸微卫星标记进行高分辨率熔解曲线分析。CD8? TILs表达采用免疫组织化学法检测，使用抗CD8α抗体，由两名病理医师独立评估，分为高表达和低表达两类。化疗反应采用实体瘤疗效评价标准（RECIST）评估，基于化疗前后腹部CT扫描的肿瘤最长径变化进行判定。数据分析采用SPSS 26软件，使用卡方检验或Fisher精确检验，P<0.05为差异有统计学意义。

三、研究结果

受试者基本特征

共41例受试者，其中女性24例、男性17例，平均年龄55.1±12.6岁。组织学类型以腺癌为主（92.7%），78%为高分化肿瘤。分子分析显示，大多数患者（92.7%）为微卫星稳定（MSS），仅少数为MSI-L（2.4%）或MSI-H（4.9%）。30例（73.2%）为直肠癌，11例（26.8%）为结肠癌。19例（46.3%）表现为CD8? TILs高表达。化疗反应以部分反应（41.5%）和疾病稳定（31.7%）最为常见。

MSI状态与受试者特征的单因素分析

单因素分析显示，仅年龄与MSI状态存在统计学显著关联（P<0.05）。所有MSI受试者均属于早发性结直肠癌（3/3，100%），而大多数MSS受试者属于晚发性。

CD8? TILs表达相关变量的单因素分析

年龄、疾病分期和化疗反应三个变量与CD8? TILs表达显著相关（P<0.05）。III期患者中16例（39%）表现为CD8? TILs高表达，高于IV期患者。CD8? TILs高表达患者在部分反应组中更为常见，而CD8? TILs低表达患者在疾病进展组中更为常见。

化疗反应相关受试者特征的单因素分析

年龄（P=0.009）、疾病分期（P=0.001）、化疗方案（P=0.006）以及MSI状态与CD8? TILs表达的组合（P=0.001）与化疗反应显著相关。疾病进展在早发性患者中更为常见，而晚发性患者更多获得部分反应。IV期患者疾病进展比例最高（17%），III期患者部分反应比例最高（34.1%）。接受FOLFOX方案（氟尿嘧啶、亚叶酸钙和奥沙利铂）的患者疾病进展更为常见（22%），而接受氟尿嘧啶和亚叶酸钙方案的患者更多获得部分反应（29.3%）。MSS且CD8? TILs低表达的患者最常见表现为疾病稳定（24%）和疾病进展（19.5%），而MSS且CD8? TILs高表达的患者以部分反应为主（36.6%），且未观察到疾病进展病例。

四、讨论与结论

讨论部分指出，本研究中MSI检出率为7.3%，低于西方国家报道的约15%的水平，与既往印度尼西亚人群数据一致。MSI状态与CD8? TILs表达之间未发现显著关联（P=0.999），这与部分既往研究结果不一致。研究人员认为，MSI病例比例较低可能是导致未观察到显著关联的主要原因。CD8? TILs高表达与较早的疾病分期和更好的化疗反应显著相关，支持肿瘤免疫微环境活跃可增强治疗敏感性的观点。高CD8? TILs表达患者较少出现IV期疾病，提示肿瘤内免疫浸润对远处转移具有潜在保护作用。

研究结论为：CD8? TILs高表达与结直肠癌更早的疾病分期和更好的化疗反应显著相关，而MSI状态在本队列中较为罕见且临床病理关联有限。无论MSI状态如何，CD8? TILs高表达患者均表现出更优的治疗结局，凸显了免疫浸润作为化疗反应关键预测因子的作用。尽管MSI肿瘤已知可从免疫治疗中获益，但其在本队列中的低患病率限制了其临床影响。这些发现支持CD8? TILs表达作为治疗分层实用生物标志物的临床潜力，但仍需更大规模的研究进一步验证。