《International Journal of Biological Macromolecules》：Mannatide modulates immune response and gut microbiota in cyclophosphamide-induced immunosuppressed BALB/c mice
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摘要曼纳特肽（Mannatide）是一种多糖基免疫调节剂，在中国已被广泛用于增强免疫功能，但其机制仍研究不足。本研究调查了曼纳特肽在环磷酰胺（CTX）诱导的免疫抑制小鼠中的免疫保护效应，重点关注其对肠道微生物群及相关信号通路的调节。结果表明，曼纳特肽恢复了免疫器官指数（脾脏和
摘要
曼纳特肽（Mannatide）是一种多糖基免疫调节剂，在中国已被广泛用于增强免疫功能，但其机制仍研究不足。本研究调查了曼纳特肽在环磷酰胺（CTX）诱导的免疫抑制小鼠中的免疫保护效应，重点关注其对肠道微生物群及相关信号通路的调节。结果表明，曼纳特肽恢复了免疫器官指数（脾脏和胸腺），提高了血清细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）水平，改善了CD4+/CD8+比值，并上调了肠道紧密连接蛋白（Claudin1、Occludin1、ZO-1）。此外，曼纳特肽还减弱了CTX诱导的p38和JNK磷酸化，并将凋亡相关标记物转变为保护性谱型，表现为脾细胞中Bax表达减少和Bcl-2表达增加。此外，肠道TLR4和p65 mRNA的增加表明这是天然免疫信号的恢复，而不仅仅是简单的抗炎作用。肠道微生物群分析显示 拟杆菌门/厚壁菌门 比值恢复，富含产生SCFA的属（副拟杆菌属、梭菌菌落-UCG-014），这与粪便中SCFA（乙酸、丁酸）的增加相关。总之，这些发现表明曼纳特肽与CTX治疗小鼠的免疫恢复有关，并伴随肠道微生物群、SCFA产生及免疫相关信号通路的变化，为针对肠-免疫轴的辅助疗法提供了见解。
引言
肠道微生物群（GM）是定植于结肠的复杂生态系统，通过调节免疫细胞活性、细胞因子分泌和肠道屏障完整性，在维持免疫稳态中发挥着关键作用 [1], [2], [3]。短链脂肪酸（SCFAs）是饮食纤维发酵产生的微生物代谢物，通过增强上皮屏障功能和抑制炎症进一步调节免疫反应 [1], [2], [4]。肠道微生物群失调与多种免疫相关疾病有关，包括化疗引起的免疫抑制 [4], [5], [6]。环磷酰胺（CTX）是一种广泛使用的化疗药物，它不仅抑制免疫器官功能和耗竭免疫细胞，还破坏肠道微生物群组成，加剧肠道炎症，形成免疫抑制的恶性循环 [7], [8], [9]。天然多糖因其低毒性和免疫调节特性而闻名，已成为通过恢复微生物平衡和增强SCFAs产生来对抗CTX诱导毒性的有前景的候选药物 [10], [11], [12], [13]。生物活性糖肽增强肠道屏障功能，表现出免疫调节、抗炎、抗癌、抗病毒和抗氧化活性 [14], [15], [16]。曼纳特肽是一种源自α-溶血性链球菌33#的糖肽，临床上用于缓解化疗副作用。该糖肽主要由甘露糖组成，含有少量葡萄糖。结构上，其多糖结构域由α-(1?→?6)-连接的甘露糖残基质链组成，该基链在O-2位广泛分支，形成(1?→?2,6)-连接的甘露糖残基。侧链主要由末端、(1?→?2)-连接和(1?→?3)-连接的甘露糖残基，以及(1?→?4)-连接的葡萄糖和(1?→?4,6)-连接的葡萄糖残基组成 [17]。然而，其机制，特别是其与肠道微生物群的相互作用，仍知之甚少 [18], [19], [20]。先前的研究主要关注其对巨噬细胞活化和白细胞增殖的影响。尽管如此，关键差距依然存在：曼纳特肽是否通过微生物群重塑缓解免疫抑制，其对SCFAs代谢的动态影响，以及其对粘膜和全身免疫的协同调节 [21], [22], [23]。
因此，本研究旨在采用综合方法评估曼纳特肽在CTX处理小鼠中的免疫增强效果，包括肠道微生物群分析、SCFA定量和分子通路分析。我们调查了肠道微生物群改变、SCFA产生、MAPK信号、NF-κB相关基因表达和凋亡相关蛋白是否与曼纳特肽介导的免疫恢复有关。我们的结果表明，曼纳特肽有效地改善了CTX处理小鼠的免疫功能，并揭示了微生物群与SCFA之间值得进一步因果验证的关联。
章节片段
材料与试剂
曼纳特肽口服溶液购自成都乐尔药业有限公司。它是含有10 mg曼纳特肽（1 mg/mL）的10 mL溶液，密封保存在阴凉处（<20 °C）。环磷酰胺注射液购自江苏恒瑞医药股份有限公司。IL-2、IFN-γ和TNF-α的ELISA试剂盒购自成都锐思生物科技有限公司。CAT、GSH和ALT试剂盒购自武汉依洛克生物科技有限公司（中国湖北）。大鼠抗小鼠
曼纳特肽对免疫抑制小鼠体重和免疫器官指数的影响
小鼠连续三天腹腔注射CTX后，我们观察到摄食量减少和嗜睡的出现，表明CTX诱导的免疫抑制小鼠模型建立成功。随后，按计划通过灌胃给药曼纳特肽，并记录每日体重测量值（图 1A 和表 3）。显而易见，CTX注射三天后，体重与正常组（NC）相比显著下降
讨论
本研究阐明了曼纳特肽在CTX诱导的免疫抑制小鼠中的免疫调节机制，重点关注肠道微生物群重塑和SCFAs代谢。我们的发现表明，曼纳特肽通过恢复免疫器官指数、增强细胞因子分泌、改善肠道屏障功能和调节肠道微生物群组成，有效地减轻了CTX诱导的免疫抑制。这些结果支持了肠-免疫轴在多糖介导
结论
曼纳特肽减轻了BALB/c小鼠CTX诱导的免疫抑制，证据包括免疫器官指数、血清细胞因子水平、CD4+/CD8+平衡、脾组织学结构、肠道屏障相关基因表达以及抗氧化/肝功能相关指数的部分恢复。曼纳特肽还减弱了脾脏p38/JNK磷酸化，并将Bax/Bcl-2表达转变为抗凋亡谱型，尽管Caspase-3的结果需要使用裂解的Caspase-3或
CRediT 作者贡献声明
冯艳娇：写作 - 初稿，可视化，方法，调查，数据管理。曾越：写作 - 初稿，可视化，方法，调查，数据管理。张学：写作 - 初稿，可视化，方法，调查，数据管理。梁丽：软件。杨晨：方法，数据管理。刘伟：形式分析。严军：验证。何刚：写作 - 审阅与编辑，监督，资源，项目管理，资金获取，
利益冲突声明
作者声明以下可能被视为潜在利益冲突的经济利益/个人关系：何刚报告提供了来自四川省科学技术支撑计划的经济支持。何刚报告与四川省天然产物与小分子合成重点实验室开放课题有包括：资助拨款的关系。如果有其他作者，他们声明没有已知的竞争经济
致谢
本工作得到四川省科学技术计划（拨款编号：2019YFH0054 和 2020YFH0205）、四川省天然产物与小分子合成重点实验室开放课题（拨款编号：TRCWYXFZCH2022B01 和 TRCWYXFZCH2022B02）以及成都大学师资培训质量与教学改革项目（拨款编号：CDJGB2022156）的支持。作者感谢 OE Biotech Co., Ltd. 在测序和数据处理方面提供的协助。
冯艳娇|曾越|张学|梁丽|杨晨|刘伟|严军|何刚
