Calu-3细胞作为博尔纳病病毒1（BoDV-1）的新型高效细胞培养系统

《Virus Research》：Calu-3 cells as novel efficient cell culture system for Borna disease virus 1 (BoDV-1)

　　

• Calu-3细胞被鉴定为博尔纳病病毒1的新型细胞培养系统。
• BoDV-1 RNA在Calu-3细胞上清中的释放最为高效。
• 在持续感染的Calu-3细胞中，法匹拉韦未能抑制BoDV-1 RNA的释放。

博尔纳病病毒1（Borna disease virus 1, BoDV-1）为包膜负链RNA病毒（单股负链RNA病毒目，博尔纳病毒科），基因组约8.9 kbp，近年被证实可引起人畜共患重症感染，病死率高。人类感染多源于双色白齿鼩（*Crocidura leucodon*）储存宿主的局部溢出传播。病毒在人体及马、羊驼等终末宿主中呈现高度嗜神经性，而储存宿主经唾液、尿液、粪便及皮肤排毒。目前尚无获批疗法，且因病毒在体外不产生细胞病变效应（cytopathic effect, CPE），T细胞驱动的免疫病理损伤被认为是致病关键。本研究旨在比较多种人源细胞系（A549、Caco-2、Calu-3、少突胶质瘤细胞OL、SK-N-AS）及Vero细胞的感染性和病毒释放动力学，以优化BoDV-1病毒储备的体外生产体系，并评估法匹拉韦（favipiravir, T-705）在不同细胞系中的抗病毒效果。研究采用BoDV-1分离株“Regensburg 2020”（基因簇4）感染上述细胞，定期收集上清进行RT-qPCR定量，并以PDH-PCR校正细胞数；利用基于qPCR读数的终点稀释法测定感染性病毒颗粒；在持续感染的Vero和Calu-3细胞中检测法匹拉韦的抑制作用，并比较HAND2 mRNA表达水平。结果显示：所有受试细胞系均支持BoDV-1 RNA释放，但Calu-3细胞最早（感染后6天）即出现上清RNA超过输入量，且至13天时RNA拷贝数最高（几何均数10^8.40±0.64拷贝/mL）；该现象并非由于细胞增殖差异，因Calu-3细胞最终细胞数最低，而单细胞RNA拷贝数及上清/细胞RNA比值均最高。免疫染色显示Calu-3、OL和Vero细胞感染率>90%，但Calu-3细胞单细胞内RNA载量更高。终点稀释法（n=1，合并三次实验上清）显示Calu-3细胞上清中感染性病毒颗粒浓度最高。法匹拉韦在Vero细胞中可抑制BoDV-1 RNA释放（IC₅₀=38 μM），但在持续感染的Calu-3细胞中完全无效；在从头感染模型中仅在高浓度（1000 μM）下于14天时观察到约2个log₁₀的轻微下降。HAND2在Calu-3细胞中表达极弱，排除其介导耐药的可能。本研究首次报道Calu-3细胞能高效释放BoDV-1 RNA至上清，且不依赖病毒株适应或特定基因簇，为快速制备高滴度病毒储备提供了实用工具，并提示上呼吸道上皮可能在病毒进入中发挥作用。法匹拉韦在Calu-3细胞中的疗效缺失进一步表明其体外抗BoDV-1效果具有细胞系依赖性，需要深入探究机制并开展体内研究以评估其临床应用潜力。
**结论**：Calu-3细胞对制备含BoDV-1的上清液具有实际应用价值，但其表型背后的分子机制尚待阐明，需在后续实验中进一步研究。