天然保存粪样中原态处理的蛔虫（Ascaris Lumbricoides）、十二指肠贾第虫（Giardia Duodenalis）及带绦虫属（Taenia spp.）表面电荷的评估

《Acta Parasitologica》：The Evaluation of Surface Charges of Ascaris Lumbricoides, Giardia Duodenalis, and Taenia spp., in Preserved Fecal Samples Processed in Natura

　　

目的：粪便中排出的寄生虫结构具有由其所在环境相互作用产生的化学特征。这些记录较少的理化条件可能干扰用于检测蠕虫卵和幼虫、原虫包囊、卵囊及孢子的分离技术，并对通常灵敏度低至中等的诊断方案产生负面影响。因此，研究人员旨在评估蛔虫（Ascaris lumbricoides）、十二指肠贾第虫（Giardia duodenalis）和带绦虫属（Taenia spp.）物种的表面电荷（以ζ电位（ZP）表示）。 方法：研究人员筛查高强度阳性的粪便样本，将阳性样本经400 μm与200 μm网筛过滤，取500 μL等分试样加9 mL去离子水稀释并离心（490 g / 5 min），该稀释离心步骤重复5次以获得浓集寄生虫沉淀，转入含7.5% formalin的去离子水培养皿中，经立体显微镜观察后用10 μL微量移液器采集卵和包囊，保存于2 mL Eppendorf管。 结果：使用Zetasizer nano设备分析ζ电位，三重复平均值为十二指肠贾第虫?28 mV、蛔虫?21.9 mV、带绦虫属?18.4 mV。 结论：研究人员得出结论，天然粪便样本中这些寄生虫结构表面的负电荷会对实验室诊断技术产生不利影响。

论文解读：《Acta Parasitologica》发表的表面电荷研究

研究背景方面，肠道寄生虫在全球广泛流行，在卫生条件差、社会经济脆弱人群中流行病学风险高。常规实验室诊断常用自发沉淀和离心沉淀（formalin、乙醚或乙酸乙酯）等方法，文献中多关注寄生虫结构的具体密度以改进浓集技术，但很少考虑寄生虫表面的静电作用力与疏水性。这些被忽视的理化因素会降低回收效率和诊断灵敏度。已有研究提示，贾第虫（Giardia duodenalis）包囊、隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）卵囊在受控条件下具负表面电荷，日本血吸虫（Schistosoma mansoni）卵可与顺磁微球通过静电作用分离，溶解气浮（dissolved air flotation）等新技术也依赖表面电荷与载体会吸附机制。因此，研究人员希望在缓冲formalina保存的粪便中，不使用化学试剂额外处理，评估两种蠕虫卵与一种原虫包囊的ζ电位（ZP，zeta potential）。

主要关键技术方法：样本来自巴西坎皮纳斯市Ouro Verde Hospital—Municipal Laboratory，经Unicamp伦理委员会审批（79823117.7.0000.5404）；用Kato-Katz法筛出高强度感染样本；经400 μm和200 μm筛离心过滤，去离子水洗涤离心5次浓集；立体显微镜下用10 μL移液器手工捕获洁净卵/包囊；以Malvern Zetasizer nano ZS测ZP，每物种三样本、三重复，BioEstat 5.0做ANOVA（p<0.05）。

研究结果如下。

引言（Introduction）：研究人员指出粪便寄生虫结构外膜特征会与碎屑和粪质互作，疏水性与表面电荷是描述其与肠/粪介质互作的重要因素；现有浓集法忽略静电与疏水属性，故本研究聚焦formalin保存粪样中无额外化学试剂处理的ZP。

方法（Methods）：抽样与伦理部分说明使用坎皮纳斯医院阳性粪样并获伦理批准，以Kato-Katz定高强度感染。卵包囊分离技术部分说明1500 mg粪经筛与490 g离心，1 mL沉淀加9 mL去离子水重复离心5次，Petri皿中分散后立体显微镜观察并用10 μL移液器转移，重复6次获得400卵与超1000包囊。ζ电位评估部分说明分装至含7.5% formalin管，用Zetasizer nano ZS依电泳迁移率与多普勒散射测ZP（mV）。统计部分说明以均值±标准差呈现，ANOVA比较组间，p<0.05为显著。

结果（Results）：筛查42份阳性样，选各3份高强度G. duodenalis、A. lumbricoides、Taenia spp.；ZP范围?14.2至?32.1 mV，G. duodenalis包囊最负，均?28 mV，软件判定结果质量good。

讨论（Discussion）总结：研究人员发现A. lumbricoides卵、Taenia spp.卵与G. duodenalis包囊在手工无化学试剂分离后均呈负表面电荷，ZP介于?14.2至?32.1 mV，其中A. lumbricoides与Taenia spp.卵表面电荷属首次报道。既往研究显示Giardia和Cryptosporidium的ZP随pH变化，中性pH下其值更负；Ascaris suum卵疏水性强，A. lumbricoides卵具外蛋白膜、几丁质中层与脂质层，可解释疏水性质；水相双相体系（ABS，aqueous biphasic system）研究提示其下层浓集与上层存在排斥离子互作。Formalin-Ether Concentration（FEC）研究中改变g力、时间与表面活性剂会影响沉淀产量，说明存在抵抗沉降/浮起的化学力。常规浓集用ZnSO₄、NaCl、蔗糖等可损形态，乙醚、formaldehyde、乙酸乙酯等挥发物有害，故可用离子化合物降低粪悬液排斥电荷。研究人员认为本结果可指导重新评估浓集方案，也可启发针对肠道病原的纳米颗粒合成。

结论（Conclusion）翻译：研究人员得出结论，天然粪便样本中这些寄生虫结构表面所呈现的负电荷会对实验室诊断技术产生负面影响。