《Trees》：Plant growth-promoting rhizobacteria enhance adventitious rooting of mini-cuttings from Ilex paraguariensis clones
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关键信息：植物促生根际细菌提高了马黛茶微型插穗的不定根形成，尤其在低生根基因型中；这些细菌显示出提高无性繁殖效率的潜力。
摘要：马黛茶（巴拉圭冬青，Ilex paraguariensis A. St.-Hil.）是南美洲具有重大经济、社会和生态意义的森林树种
关键信息：植物促生根际细菌提高了马黛茶微型插穗的不定根形成，尤其在低生根基因型中；这些细菌显示出提高无性繁殖效率的潜力。
摘要：马黛茶（巴拉圭冬青，Ilex paraguariensis A. St.-Hil.）是南美洲具有重大经济、社会和生态意义的森林树种。然而，通过微型插穗进行无性繁殖仍因生根率低而受到限制。本研究旨在调查与马黛茶无性系相关的细菌群落，并鉴定能够诱导微型插穗不定根形成的植物促生根际细菌（PGPR）。从具有高生根能力的无性系中获得细菌分离株，并通过部分16S rRNA基因测序进行表征和鉴定。同时评估了具有对比生根能力的无性系相关细菌群落。共获得87个细菌分离株，其中15个被选出，属于不同的PGPR相关属。无性系间细菌多样性无显著差异，变形菌门（Proteobacteria）和放线菌门（Actinobacteriota）最为丰富。使用从马黛茶和其他物种分离的细菌进行了接种试验。细菌接种对生根率和根干重产生了积极影响。在高生根无性系中，分离株ERR 1227将生根率提高至85%；然而，该值与未接种对照的60%无显著差异。在低生根无性系中，分离株CNPF 715达到35%的生根率，高于未接种对照的18.3%。分离株CNPF 363在两组中均表现出一致的结果（高生根71.7%，低生根31.7%）。这些发现表明，选定的根际细菌可以增强不定根形成，尤其在低生根基因型中，凸显了PGPR作为改善马黛茶无性繁殖的有前景工具。
巴拉圭冬青（Ilex paraguariensis A. St.-Hil.）是南美洲重要的非木材森林资源，其叶片用于制作马黛茶等产品，具有显著的经济、社会和生态价值。然而，该物种的无性繁殖——特别是微型插穗扦插——长期面临生根率低、不同基因型响应差异大等瓶颈，严重制约了优良基因型的推广和育种进程。已有研究表明，植物促生根际细菌（plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR）能够通过合成植物激素、溶解磷酸盐、促进生物固氮及诱导系统抗性等机制促进植物生长，但在巴拉圭冬青无性繁殖中的系统应用仍鲜有报道。因此，该研究旨在调查与不同生根能力巴拉圭冬青无性系相关的细菌群落，筛选具有促生潜力的根际细菌，并评估其对微型插穗不定根形成的促进作用。该论文发表在《Trees》期刊上。
研究人员从巴西Embrapa林业苗圃建立的克隆微型扦插园中选取材料，供试无性系来自2016年建于巴西巴拉那州Ivaí市（25o01'S，50o47'W）的种源/后代试验林。他们从高生根能力的无性系（EC40和IVA13）的根际基质（加拿大泥炭与蛭石混合物）中分离细菌，通过形态学分组、部分16S rRNA基因测序和系统发育分析鉴定菌株；同时利用16S rRNA基因宏条形码技术比较了不同生根能力无性系（高生根EC40、IVA13，低生根EC22、IVA49）的根际细菌群落组成。随后开展两轮温室接种试验：第一轮以低生根无性系进行预筛选，第二轮分别采用高生根（6个无性系混合）和低生根（7个无性系混合）两组材料，设置9个处理（5个预筛选优势菌株、3个附加菌株和未接种对照），每处理60个微型插穗，120天后测定生根率、未生根率、死亡率、根长、根干重和萌梢数等指标。
**细菌分离、形态学表征与16S rRNA基因测序**
从高生根无性系中共获得87株细菌，其中EC40有52株，IVA13有35株。根据菌落形态特征划分为15个表型组，每个表型组选取代表菌株进行测序，最终鉴定为9个不同属，包括Lysinibacillus、Sphingobium、Leifsonia、Rhizobium、Ochrobactrum、Microbacterium、Ollibium和Afipia等。系统发育分析显示，多数菌株与已知具有促生活性的属亲缘关系密切，例如CNPF 733与Rhizobium属多种近缘，CNPF 715与Ollibium composti近缘。部分菌株（如CNPF 707、CNPF 708）与潜在人类病原体Brucella近缘，提示后续需进行生物安全评估。
**16S rRNA基因宏条形码分析**
通过对四个无性系根际样品的高通量测序，经DADA2质控后，各样品保留了68.3%~74.4%的高质量非嵌合序列。α多样性（Shannon指数和Faith's PD）和β多样性（Bray-Curtis距离）均无显著差异，表明不同生根能力无性系的根际细菌群落结构总体相似。共检测到40个细菌门，其中变形菌门（Proteobacteria）占33.14%，放线菌门（Actinobacteriota）占24.34%，为主要优势类群；属水平上以Kribbella、Haliangium、Streptomyces等为主。该结果说明，无性系间生根能力的差异并非由根际细菌群落的整体多样性所决定，而更可能受植物内在遗传因素控制。
**巴拉圭冬青插穗生根**
第一轮预筛选中，不同菌株对微型插穗生根表现出促进或抑制的对比效应。第二轮接种试验中，在高生根无性系组，菌株ERR 1227（Neobacillus sp.）表现出最高生根率（85.0%）和最大根干重（27.4 mg），但该生根率与未接种对照（60.0%）无显著差异，表明高生根材料自身生理潜力较强，外源菌株增益有限。在低生根无性系组，ERR 1227未显示促生效果（生根率13.3%），而菌株CNPF 715（Ollibium sp.）将生根率从对照的18.3%显著提高至35.0%，菌株CNPF 363（Mes
