识别伪狂犬病病毒gB蛋白保守线性中和表位的单克隆抗体的特性分析

《Archives of Microbiology》：Characterization of a monoclonal antibody recognizing a conserved linear neutralizing epitope of pseudorabies virus gB protein

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摘要

伪狂犬病病毒（PRV）属于α-疱疹病毒，可感染多种哺乳动物。该病毒主要在猪群中传播，但也可感染人类，对公共健康构成严重威胁。糖蛋白B（gB）是参与病毒侵入和免疫识别的重要结构蛋白，也是PRV中和抗体的关键靶标。本研究采用真核和原核系统表达了gB糖蛋白以免疫小鼠。研究人员分析了分泌抗gB抗体的杂交瘤细胞系，并确定了该单克隆抗体所针对的中和表位。通过细胞融合技术获得了六种抗PRV单克隆抗体。对这些单克隆抗体的特性分析显示，4A10的抗体的间接免疫荧光（IFA）滴度为1:3200，中和滴度为1:2^4，亲和力为3.4 × 10^8 L/mol。gB的胞外区域被分为七个片段。通过ELISA检测了这七个截短蛋白与六种单克隆抗体的反应，结果发现gB6为免疫优势表位。进一步的截断实验表明，4A10识别出肽段⁶¹⁵RVPGERGTC⁶²³，该表位位于gB羧基末端（C末端）的环状结构中，并属于B细胞线性表位。同源性建模和分子对接技术显示，4A10通过其重链CDR3可变区与⁶¹⁵RVPGERGTC⁶²³结合。抗原表位分析表明，该表位在不同PRV菌株间高度保守。本研究发现了PRV gB上一个高度保守的线性中和表位，为改进PRV诊断方法及优化预防和控制策略提供了分子基础。伪狂犬病病毒（PRV）在全球养猪业中造成了巨大的经济损失。糖蛋白B（gB）是中和抗体和疫苗设计的主要靶标。本研究制备了一种针对PRV gB的中和单克隆抗体（mAb），并确定了其关键线性中和表位。该表位在不同流行PRV菌株间高度保守，体现了其在病毒抗原性中的关键作用。这项工作阐明了PRV中和的分子机制，并鉴定出一个保守的表位，未来经进一步验证后可能作为诊断工具，并为抗病毒研究提供参考。

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