《Frontiers in Microbiology》：Development and evaluation of a two-tube multiplex real-time PCR assay for differential detection of Monkeypox virus clades Ia, Ib, IIa, and IIb
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猴痘病毒（Monkeypox virus, MPXV）自2022年以来已引发两次国际关注的突发公共卫生事件，不同分支（Ia、Ib、IIa和IIb）共同流行，且毒力和传播模式存在差异。快速鉴别这些分支对疫情控制和临床管理至关重要。研究人员开发并验证了一种靶向H3
猴痘病毒（Monkeypox virus, MPXV）自2022年以来已引发两次国际关注的突发公共卫生事件，不同分支（Ia、Ib、IIa和IIb）共同流行，且毒力和传播模式存在差异。快速鉴别这些分支对疫情控制和临床管理至关重要。研究人员开发并验证了一种靶向H3L基因的双管多重实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法，该方法首先区分分支I和分支II，随后在独立反应中将分支I和II进一步分为Ia、Ib、IIa和IIb亚型。该检测方法具有高灵敏度，使用标准质粒时对分支Ia、Ib、IIa和IIb的检测限分别为100拷贝/反应、10拷贝/反应、10拷贝/反应和1拷贝/反应。良好的特异性通过与其他人类病原体核酸无交叉反应得到证实，这些病原体包括痘苗病毒天坛株（VTT）、人腺病毒（HAdV）、盖塔病毒（GETV）、基孔肯雅病毒（CHIKV）、日本脑炎病毒（JEV）、登革病毒（DENV）、甲型流感病毒（IAV）、乙型流感病毒（IBV）和严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。该检测方法表现出高重复性，批内变异系数（CVs）为0.09%~1.88%，批间CVs为0.23%~2.68%。使用来自受感染食蟹猴或SCID小鼠的48份皮肤标本进行的临床评估显示，与单重qPCR检测分支IIb的一致性为100%。对于分支Ia、Ib和IIa，由于样本不可获得，临床验证不可行，其性能通过重组质粒进行了分析确认。重要的是，这48份动物标本的分支归属未经测序确认，这是当前研究的局限性。此外，这些标本来自动物模型而非人类患者；因此，结果代表临床前验证，有必要在流行地区的人类标本中进行正式临床验证。该双管多重qPCR检测方法为分析性鉴别所有四种主要MPXV分支提供了快速、灵敏且可靠的工具，并对分支IIb进行了初步临床验证。其区分新现分支的能力使其成为临床诊断、流行病学监测和未来疫情应对的宝贵工具，但仍有必要在流行地区开展进一步临床验证。
研究背景与目的
猴痘病毒（Monkeypox virus, MPXV）是痘病毒科正痘病毒属的双链DNA病毒，曾于2022年和2024年两度被世界卫生组织宣布为国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC）。当前MPXV的Ia、Ib、IIa和IIb四个分支在人群中共同流行，且毒力、病死率和传播模式差异显著
