《Molecular Immunology》：SPON2 suppression alleviates phosgene-induced acute lung injury in mice associated with JAK1/STAT3 signaling inhibition
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光气（phosgene）暴露可诱发急性肺损伤（ALI），重症可进展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS），目前缺乏特异性药物治疗。研究人员发现Spondin-2（SPON2）是F-spondin家族分泌型细胞外基质蛋白。在光气暴露小鼠模型中，肺组织24 h后SPON
光气（phosgene）暴露可诱发急性肺损伤（ALI），重症可进展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS），目前缺乏特异性药物治疗。研究人员发现Spondin-2（SPON2）是F-spondin家族分泌型细胞外基质蛋白。在光气暴露小鼠模型中，肺组织24 h后SPON2表达显著上调。研究人员通过rAAV9-shSPON2敲低SPON2，发现其可减轻肺损伤、炎症细胞浸润、肺泡结构破坏和肺水肿，降低支气管肺泡灌洗液（BALF）总蛋白与细胞数，使IL-6下降、IL-10回升。体内外结果表明，SPON2抑制可降低肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC2）凋亡，调节Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3表达。机制上，SPON2抑制伴随JAK1/STAT3磷酸化及STAT3核转位减弱。研究人员认为SPON2可能作为光气诱导ALI的潜在治疗靶点。
研究背景方面，光气（carbonyl dichloride）是工业常用化学中间体，吸入后可致肺上皮损伤、炎症风暴、肺水肿和呼吸困难，重症进展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS），相关死亡率可达50%，但目前无获批的特异性药物。Spondin-2（SPON2，分泌型细胞外基质蛋白，F-spondin家族成员）在多种肿瘤与哮喘等炎症性疾病中被报道参与生长、转移和炎症调控，但其在光气诱导ALI中的表达特征与功能尚不清楚。因此，研究人员围绕SPON2在光气肺损伤、炎症和凋亡中的作用及机制开展研究，论文发表于《Molecular Immunology》。
主要技术方法方面，研究人员使用雄性的C57BL/6小鼠建立光气暴露ALI模型，并以rAAV9-shSPON2进行体内SPON2敲低；同时采用小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系MLE12，以脂多糖（LPS）诱导炎症模型并用siSPON2敲低。研究结合肺组织苏木精-伊红（H&E）染色、免疫荧光（IF）、BALF分析、蛋白质印迹（Western blotting）、TUNEL凋亡检测、流式细胞术、定量逆转录PCR（qRT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）开展验证。
3.1. SPON2 expression is upregulated in the lung tissues of phosgene-exposed mice：研究人员通过H&E染色、Western blotting和IF染色发现，光气暴露后小鼠肺组织出现肺泡隔增厚、肺泡塌陷和炎性浸润，SPON2蛋白水平在24 h显著上调，且SPON2可与SFTPC共定位，提示其在肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC2）中高表达。
3.2. SPON2 knockdown attenuates phosgene-induced pulmonary inflammatory responses：研究人员以rAAV9-shSPON2敲低肺组织SPON2后，H&E显示肺损伤减轻，湿干重比下降，BALF总蛋白和细胞数回降，BALF与血清中IL-6降低、IL-10升高，说明SPON2抑制可缓解光气诱导的肺部炎症。
3.3. SPON2 knockdown attenuates cell apoptosis in mice with phosgene-induced lung injury：TUNEL与Western blotting结果显示，光气暴露增加TUNEL阳性细胞，并引起Bcl-2下降、Bax和cleaved caspase-3上升；SPON2敲低可逆转这些改变，表明SPON2抑制减轻体内肺细胞凋亡。
3.4. Suppression of SPON2 alleviates LPS-induced inflammatory responses and apoptosis in murine MLE12 cells：在MLE12细胞中，LPS上调SPON2和cleaved caspase-3，使IL-6 mRNA升高、IL-10 mRNA降低；siSPON2转染后，炎症因子转录异常被纠正，流式与TUNEL显示的凋亡也明显减少，说明SPON2在AEC2炎症与凋亡中发挥促损伤作用。
3.5. SPON2 regulates inflammation and apoptosis associated with JAK1/STAT3 signaling：Western blotting与IF显示，LPS处理增强JAK1和STAT3磷酸化并促进STAT3核转位，光气小鼠肺组织p-JAK1/JAK1与p-STAT3/STAT3比值升高；SPON2敲低后上述激活被削弱，提示SPON2对炎症和凋亡的调控部分经由JAK1/STAT3通路实现。
讨论部分总结，研究人员指出ALI/ARDS缺乏经验验证的特异性治疗，炎症与凋亡是核心病理环节。本文显示光气暴露后SPON2上调，其抑制可恢复IL-10相关抗炎反馈、降低IL-6/IL-10比值、减少AEC2凋亡，并通过抑制JAK1/STAT3信号减轻肺损伤。作者也说明研究局限包括未阐明光气诱导SPON2的上游机制、未评估内皮屏障、凝血异常和纤维化增殖、以LPS替代直接光气细胞暴露、缺救援实验、组织学样本量有限以及结论来自临床前模型。
研究结论部分译为：总体而言，研究人员发现SPON2在体和离体模型中均显著上调，SPON2抑制可通过抑制JAK1/STAT3通路，改善组织学损伤、炎症和凋亡。SPON2敲低通过抑制肺组织炎症与细胞死亡缓解光气诱导ALI，该保护作用与JAK1/STAT3信号抑制相关。这些结果揭示了SPON2在ALI发病机制中的新机制，并提示其可作为光气暴露患者的潜在治疗靶点。
