针对克里米亚-刚果出血热病毒的双抗原AdV5疫苗诱导优越的体液免疫和Th1偏向的细胞免疫

《Scientific Reports》：Dual-antigen AdV5 vaccines against Crimean-Congo hemorrhagic fever virus induce superior humoral and Th1-biased cellular immunity

　　

基于腺病毒载体的平台已被证明在疫苗开发中具有高效性，因此可被视为针对克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）免疫策略的潜在候选方案。本研究设计了四种复制缺陷型重组人腺病毒血清型5（AdV5）载体，用于表达CCHFV抗原：一种双抗原NP-P2A-Gc构建体，以及分别表达核蛋白（NP）、糖蛋白复合物前体（GPC）和成熟糖蛋白（Gc）的单顺反子构建体。在符合药品生产质量管理规范（GMP）的生产和纯化之后，研究人员在BALB/c小鼠（每组n=4）中评估了候选疫苗的免疫原性，并在IFNAR^?/?小鼠（每组n=4）中评估了保护效力，采用抗原同源或异源的初免-加强免疫方案。动物于第0天接受初免，第28天接受加强免疫，随后于第42天接受致死性CCHFV攻击（1000 TCID₅₀）。通过ELISA、病毒中和试验、细胞因子谱分析、ELISpot和流式细胞术表征免疫反应。评估了攻击后的存活率、靶器官病毒载量及安全性特征。所有AdV5构建体均成功表达目标抗原，并诱导快速血清阳转，单剂初免后75–100%的动物表现出抗体反应。双抗原制剂诱导了最强的Th1极化反应，特别是核蛋白+Gc组合，其干扰素-γ（IFN-γ）产生量比基线高30倍以上，并优先扩增CD4⁺辅助性T细胞（占CD3⁺群体的60–70%）。中和抗体滴度在各组间存在差异（高应答者为80–160任意单位），但与存活结果无直接相关性。致死性攻击后，多种疫苗制剂在10天观察期内实现了100%存活，而仅对照组未显示保护作用。所有接种动物在肝脏和脾脏组织中的病毒载量均显著降低2至4个对数，部分动物实现了病毒的完全清除。此外，在受检组织中未检测到载体脱靶传播，证实了构建体的安全性特征。表达CCHFV抗原的腺病毒血清型5（AdV5）载体免疫可诱导强效的体液和细胞免疫反应，在大多数评估制剂中赋予针对致死性病毒攻击的100%保护。部分动物观察到无菌免疫，且证据表明保护作用通过多种免疫机制运作，包括中和和非中和抗体介导的途径。这些结果有力地支持基于AdV5的CCHFV疫苗的进一步临床开发，多种制剂策略显示出高效性，为临床推进提供了灵活性。这些候选疫苗已成功实施符合GMP的生产方法，支持其向非人灵长类研究和I期临床试验推进。

克里米亚-刚果出血热（CCHF）是由Orthonairovirus haemorrhagiae经蜱传播引起的急性病毒性疾病，病死率最高可达30%，广泛流行于非洲、亚洲、中东和东欧，并已扩展至伊比利亚半岛。目前尚无获批的人用疫苗或特异性治疗药物，世界卫生组织（WHO）将其列为优先研发疾病，2024年研发路线图仍将疫苗开发列为最关键干预措施。腺病毒载体平台因安全性记录良好、单剂可诱导强免疫反应、热稳定性优于mRNA疫苗以及生产工艺成熟等优势，成为CCHFV疫苗研发的重要方向。既往研究多采用黑猩猩腺病毒载体