不同保鲜处理下采后凤梨释迦果肉（Annona cherimola Mill × A. squamosa L.）中基因表达研究的可靠内参基因的鉴定与验证

《International Journal of Molecular Sciences》：Identification and Validation of Reliable Reference Genes for Gene Expression Studies in Postharvest Atemoya Pulp (Annona cherimola Mill × A. squamosa L.) Subjected to Different Preservation Treatments

　　

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）是一种广泛用于定量基因表达的技术。然而，准确的数据标准化需要在不同实验条件下保持恒定表达水平的稳定内参基因。迄今为止，尚未有适用于凤梨释迦果实（Annona cherimola Mill × A. squamosa L.）的内参基因得到验证。本研究旨在评估凤梨释迦候选内参基因在不同组织、采后贮藏阶段及多种处理条件下的表达稳定性。为此，研究人员针对六个内参基因设计了特异性引物：泛素载体样蛋白（ubiquitin carrier-like protein，UBC）、肌动蛋白7（actin 7，ACT7）、肌动蛋白11（actin 11，ACT11）、延伸因子1α（elongation factor 1α，EF1α）、18S核糖体RNA（18S ribosomal RNA，18S）和β-微管蛋白（β-tubulin，TUB）。研究人员从凤梨释迦组织（如花瓣、幼果和根）以及采后三个时间点（0、2和4天）的果肉中提取总RNA，并设置不同处理条件：28 °C、15 °C、乙烯或1-MCP处理。随后使用geNorm工具鉴定每种实验条件下最稳定的内参转录本。ACT7是凤梨释迦各组织中稳定性最高的内参基因，而UBC在所有测试的采后条件（28 °C贮藏、15 °C冷藏、乙烯和1-MCP）下均排名第一。此外，通过检测AaPG和AaERF的表达模式，验证了这些内参基因在乙烯和1-MCP处理下的适用性。总体而言，ACT7、UBC和18S的组合使用被证明是所有实验条件下最可靠的标准化策略。这一经过验证的多基因策略为未来研究凤梨释迦基因表达及采后成熟机制奠定了坚实基础。

《International Journal of Molecular Sciences》论文解读：凤梨释迦采后不同保鲜处理下内参基因的系统鉴定与验证

一、研究背景

凤梨释迦（Annona cherimola Mill × A. squamosa L.）是番荔枝科（Annonaceae）中由毛叶番荔枝与番荔枝杂交形成的种间杂种。作为一种典型的呼吸跃变型果实，其采后呼吸速率高、乙烯释放量大，导致品质迅速劣变，严重制约商业流通。低温贮藏及1-MCP等乙烯抑制剂处理可有效延缓果实成熟。解析采后过程的分子机制需要对贮藏期间差异表达基因进行转录谱分析。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）是目前应用最广泛的基因表达定量手段，但准确的数据标准化高度依赖于在不同实验条件下表达稳定且不受处理影响的内参基因。此前在番荔枝科果实研究中通常直接使用肌动蛋白（actin）作为内参，刺果番荔枝（Annona muricata L.）中虽已有内参基因稳定性评估，但凤梨释迦果实尚无系统验证报道。由于不同物种、组织及处理条件下内参基因的表达稳定性差异显著，直接借用其他物种的内参可能引入较大偏差。因此，在凤梨释迦中系统筛选并验证稳定表达的内参基因，是确保后续采后基因表达研究结果可靠的重要前提。

二、研究内容与总体结论

研究人员选取UBC、ACT7、ACT11、EF1α、18S和TUB六个候选内参基因，利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCt法及RefFinder五种算法，评估了它们在不同组织（花瓣、幼果、成熟果、枝条、根、叶片）、不同成熟阶段（采后0、2、4天）及不同处理（28 °C贮藏、15 °C冷藏、乙烯处理、1-M