《International Journal of Molecular Sciences》：Immunohistochemistry-Based Molecular Classification of Muscle-Invasive Bladder Urothelial Carcinoma: Survival Trends Across Molecular Subtypes
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肌层浸润性膀胱尿路上皮癌（MIBUC）是一种异质性疾病，呈现不同的临床结局和治疗反应。尽管分子分型提供了重要的预后信息，但其临床应用受限于较高的成本和技术复杂性，使得免疫组织化学（IHC）成为一种实用且可靠替代方法。研究人员旨在探讨基于IHC的分子亚型与总生存
肌层浸润性膀胱尿路上皮癌（MIBUC）是一种异质性疾病，呈现不同的临床结局和治疗反应。尽管分子分型提供了重要的预后信息，但其临床应用受限于较高的成本和技术复杂性，使得免疫组织化学（IHC）成为一种实用且可靠替代方法。研究人员旨在探讨基于IHC的分子亚型与总生存期（OS）之间的关联。研究人员开展了一项为期4年的回顾性研究，纳入75例新诊断的MIBUC病例。采用包含五种抗体（GATA3、CK5/6、p16、FGFR3和EpCAM）的IHC检测组合，将肿瘤分为七种分子亚型（LumP、LumNS、LumU、Ba/Sq、NE样、富间质型和双阳性型）。标志物表达根据染色强度和阳性肿瘤细胞比例，采用预设的、标志物特异性截断值进行评估。对各亚型的OS进行评估，并在组间进行比较。中位OS范围为5个月（NE样型）至26个月（富间质型和双阳性型）。LumU亚型表现出最高的1年生存率，而双阳性亚型在2年和5年时显示出最有利的长期结局。相反，NE样型的1年生存率最低，而富间质型在2年和5年时的生存率最低。各分子亚型间的OS差异无统计学意义（p = 0.714）。年龄≤65岁的患者的OS显著长于老年患者（p = 0.024）。OS在性别间具有可比性（p = 0.626），且未随肿瘤形态学出现显著差异（p = 0.884）。基于IHC的分子分型是表征MIBUC分子异质性的一种可行方法，但需进一步研究来阐明其预后意义。
**肌层浸润性膀胱尿路上皮癌分子分型与生存预后的关联：基于免疫组织化学替代标记物的研究解读**
**一、研究背景与目的**
肌层浸润性膀胱尿路上皮癌（Muscle-Invasive Bladder Urothelial Carcinoma，MIBUC）约占所有新诊断膀胱肿瘤的20%，其临床特征具有侵袭性，5年生存率约为50%–60%。MIBUC涵盖多种组织学亚型（如微乳头状、巢状、浆细胞样和肉瘤样），并可呈现鳞状或腺样分化。目前，MIBUC的诊断主要依靠经尿道膀胱肿瘤电切术（TURBT）标本的病理组织学检查，标准治疗方案为根治性膀胱切除术联合盆腔淋巴结清扫，常整合以顺铂为基础的新辅助化疗。然而，即使采取积极治疗，患者结局仍高度可变，这主要归因于MIBUC显著的肿瘤生物学异质性。
基于转录组的分子分型体系已被提出并形成共识分类，定义了六种分子亚型：三种管腔型（管腔乳头型LumP、管腔非特异型LumNS、管腔不稳定型LumU）、一种基底/鳞状型（Ba/Sq）、一种神经内分泌样型（NE样）和一种富间质型。不同分子亚型具有不同的预后和预测特征，例如基底亚型总生存期（OS）较差但对新辅助化疗反应更好。然而，转录组学检测成本高、技术复杂，限制了其临床常规应用。免疫组织化学（IHC）作为广泛可及、可靠且经济的替代方法，有望用于分子分型。本研究旨在应用既往提出的五抗体IHC检测组合（GATA3、CK5/6、p16、FGFR3和EpCAM），将MIBUC分为七种分子亚型，并评估各亚型与总生存期（OS）的关联。据研究人员所知，这是首次将所有共识分子亚型纳入IHC分类器框架进行生存分析的研究。
**二、研究方法与技术**
本研究为一项回顾性研究，纳入了2017年1月至2020年12月期间在罗马尼亚Targu Mure?的两家医院病理科新诊断的75例MIBUC患者，所有病例均经TURBT标本确诊。研究人员采用Bond-Max全自动免疫组织化学染色仪进行IHC检测，使用GATA3、CK5/6、p16、FGFR3和EpCAM五种抗体。三名病理科医师在不知晓临床结局的情况下独立评估免疫组化切片并评分，评分范围限于肿瘤肌层浸润成分，综合考虑阳性肿瘤细胞百分比（0–100%，按10%递增）和染色强度（0–3分制）。分子分型采用预设算法：GATA3阳性/CK5/6阴性判定为管腔型；GATA3阴性/CK5/6阳性判定为Ba/Sq；二者双阳性为双阳性型；二者双阴性为双阴性型。在管腔型内，p16表达区分LumP（p16阴性）与LumNS/LumU（p16阳性），FGFR3表达进一步区分LumNS（FGFR3阳性）与LumU（FGFR3阴性）。在双阴性组中，EpCAM阳性判定为NE样型，EpCAM阴性判定为富间质型。统计学分析采用IBM SPSS 26.0软件，使用Kaplan–Meier法和log-rank检验进行生存比较。
**三、研究结果**
**队列的临床人口统计学特征：** 共纳入75例MIBUC患者，中位年龄71.0岁（IQR，64.0–78.5），72.0%的患者初诊时年龄超过65岁。男性69例，女性6例（男女比11.5:1）。1例患者初诊时已有转移性疾病，8例行根治性膀胱切除术，1例行部分膀胱切除术。
**肿瘤病理学特征：** 所有肿瘤均为pT2期且为高级别。55例（73.3%）为单纯尿路上皮癌形态，20例（26.7%）存在变异组织学，其中鳞状分化11例（14.7%）、腺样分化2例（2.7%）、微乳头状亚型4例（5.3%），巢状、浆细胞样和肉瘤样亚型各1例（1.3%）。
**分子亚型分布：** 基于IHC检测，采用预设算法将肿瘤分为七种分子亚型。管腔型总体占比最高，LumU占21.3%、LumP占20.0%、LumNS占17.3%，合计接近60%。双阳性亚型占18.7%，Ba/Sq、NE样和富间质型各占较少比例，合计约占四分之一。不同亚型间中位诊断年龄略有差异，从LumU的65.5岁至富间质型的74.0岁不等。女性患者仅见于LumP、LumU、Ba/Sq和双阳性组，LumNS、NE样和富间质型仅见于男性。多数分子亚型以单纯尿路上皮癌为主，而Ba/Sq和双阳性亚型中变异组织学比例相对较高，但此差异无统计学显著性（p = 0.17）。
**总生存期分析：** 随访结束时13例（17.3%）患者存活，5年存活率不足五分之一。9例行膀胱切除术的患者中7例在随访结束前死亡。全队列中位总生存期为16个月（95%CI，7.5–24.5）。年龄≤65岁患者的OS显著优于>65岁患者，中位生存期分别为25个月对12个月（p = 0.024），且1、2、5年生存率均更高（76.2%对50.0%、47.6%对35.2%、33.3%对11.1%）。男女性别间OS具有可比性，两组中位OS均为16个月（p = 0.626）。单纯尿路上皮癌与变异组织学患者的OS无显著差异（p = 0.884）。分子亚型间中位OS从NE样型的5个月至富间质型和双阳性型的26个月不等。LumU亚型的1年生存率最高，双阳性亚型在2年和5年时显示出最佳的长期生存结局，而NE样型的1年生存率最低，富间质型在2年和5年时的生存率最低。但七种分子亚型间的OS差异未达统计学显著性（log-rank p = 0.714）。
**四、研究结论与展望**
本研究首次将涵盖所有共识分子亚型的IHC分类器应用于MIBUC的生存分析。研究证实了MIBUC好发于老年男性，年龄>65岁是预后不良因素。尽管各分子亚型间的OS差异未达统计学显著性，但观察到有意义的生存趋势：管腔型（尤其是LumU和LumP）早期生存率较高，与文献中管腔型预后较好的报道一致；双阳性亚型显示出最佳的远期生存；NE样型和富间质型预后较差，与既往研究将双阴性组归为最差预后组的结论相符。Ba/Sq亚型的生存率介于中间水平，与部分研究报道的基底型预后较差一致。然而，个体研究间也存在差异，如部分研究未发现管腔型与基底型长期OS的差异。
本研究存在以下局限性：由于随访数据不完整（包括失访、转诊以及缺乏可靠死因信息），无法评估无复发生存期、无进展生存期或癌症特异性生存；相对较小的样本量限制了统计效能；分子分型在膀胱癌中仍处于研究阶段，尚未常规应用于临床决策。未来的研究需在更大规模、独立的多中心队列中进行验证，同时需要建立标准化和经过验证的IHC抗体组合以确保可重复性。从临床角度来看，基于IHC的分子分型算法是一种实用的、经济的分子分层方法，尤其适用于无法开展转录组学分析的中心，有助于改善肿瘤特征描述并支持未来的患者分层。一项包含五种抗体的IHC检测组合代表了在诊断时对MIBUC进行分子分型的一种可行方法，可通过对额外生物学异质性的捕捉来补充常规组织病理学评估，但其预后价值仍需进一步研究来明确。
