基于UHPLC-ESI-MS/MS的酸奶中维生素B12测定方法建立与验证

《Analytica》：Development and Validation of a Cost-Effective and Sensitive UHPLC-ESI-MS/MS Method for Vitamin B12 Determination in Yogurt

　　

摘要

在强化食品中准确测定维生素B12面临着相当大的分析挑战，主要归因于其浓度极低（μg kg?1）以及其在乳制品中与蛋白质的结合。本研究旨在开发一种可靠且准确的方法，用于测定酸奶中的维生素B12，为复杂乳制品基质中维生素B12的常规定量提供一种稳健、灵敏且准确的手段，从而有助于食品行业的营养评估和质量控制。因此，样品制备过程包括在过量氰化物存在下进行高温水解，并利用固相萃取（SPE）柱对目标分析物进行纯化和预浓缩。UHPLC-ESI-MS/MS分析采用C18色谱柱，在正离子化模式（ESI+）下进行。实验步骤经过精心优化，考察了提取条件，包括所用溶剂、提取时间以及SPE柱的有效性。优化后的方法展现出优异的可线性（R² > 0.990）、高回收率（例如82.7–96.6%）、良好的精密度（RSD < 20%）以及适当的灵敏度（检出限：0.38 μg kg^?1，定量限：1.1 μg kg^?1）。该方法按照Eurachem指南进行了成功验证，对不确定度进行了评估，并通过谷物和牛奶基质中成功的实验室间比对测试得到了确证。