用于同时检测十种绵羊呼吸道和生殖系统病原体的两种五重实时荧光PCR检测法

《Viruses》：Two Pentaplex Real-Time Fluorescent PCR Assays for Simultaneous Detection of Ten Ovine Respiratory and Reproductive Pathogens

　　

摘要

我们开发并评估了两套五重实时荧光定量 PCR 检测（Panel 1/Panel 2），用于同时检测十种绵羊病原体。Panel 1 针对呼吸道病原体：蓝舌病病毒 (BTV)、口蹄疫病毒 (FMDV)、施马伦贝格病毒 (SBV)、小反刍兽疫病毒 (PPRV) 以及羊痘病毒 - 山羊痘病毒 (SPPV-GTPV)。Panel 2 针对繁殖道病原体：边境病病毒 (BDV)、布鲁氏菌 属 (Bru)、刚地弓形虫 (刚地弓形虫)、流产沙眼衣原体 (流产沙眼衣原体) 以及山羊关节炎 - 脑炎病毒 (CAEV)。每个 Panel 使用六个荧光通道进行检测。使用参考病原体和质粒进行的验证证实，该检测方法能有效检测目标病原体。所有目标的 95% 概率检测限 (LOD95) 范围为 2.9 至 6.1 拷贝/μL，相关系数 (R²) 大于 0.99。在高 (10⁵ 拷贝/μL) 和低 (10³ 拷贝/μL) 模板浓度下，板内和板间变异系数 (CV) 均小于 1.5%。交叉反应测试显示具有高特异性，不同目标之间无交叉检测。使用从中国多个省份收集的 620 份临床样本进行的验证显示，与参考方法具有高度一致性。该多重检测法为绵羊主要呼吸道和繁殖道病原体的鉴别检测和监测提供了一种快速、灵敏、特异且可靠的手段。