《Veterinary Research Communications》：High prevalence of picobirnavirus genogroup I in calves without association with diarrhea in a dairy cattle herd, southeast Brazil
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奶牛养殖是巴西最广泛的农业活动之一。新生犊牛腹泻仍然是一项重大挑战，对巴西奶牛群的经济和产量损失造成显著影响。双RNA病毒（PBV）被认为是一种可能与犊牛腹泻相关的潜在病毒病原体。本研究旨在检测巴西南部东南地区圣保罗州一个封闭式高产奶牛群中犊牛粪便样本中的双R
奶牛养殖是巴西最广泛的农业活动之一。新生犊牛腹泻仍然是一项重大挑战，对巴西奶牛群的经济和产量损失造成显著影响。双RNA病毒（PBV）被认为是一种可能与犊牛腹泻相关的潜在病毒病原体。本研究旨在检测巴西南部东南地区圣保罗州一个封闭式高产奶牛群中犊牛粪便样本中的双RNA病毒基因I群（GI）RNA。共采集了122份来自30日龄犊牛的粪便样本，包括腹泻犊牛（n = 16）和非腹泻犊牛（n = 106）。提取核酸并使用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）进行分析。PBV GI在54.1%（66/122）的样本中被检测到，其中大多数来自非腹泻犊牛（87.9%；58/66）。腹泻犊牛的检出率为50.0%（8/16），非腹泻犊牛为54.7%（58/106），PBV GI的存在与粪便稠度之间无显著关联（p = 0.72）。对在不同日期采集的粪便样本中的两个RT-PCR扩增子进行了测序以确认PBV GI的检测；然而，仅有一条核苷酸（nt）序列具有足够的质量用于分析。系统发育分析显示，该序列聚集在PBV GI分支内，并与一条原污水序列（93.4%）、两条人类序列（87.8%–89.8%）和一条猴序列（88.8%）具有最高的nt一致性。这些结果证实了PBV GI在奶牛群中的循环，并提示其存在与犊牛腹泻无关联。需要进一步研究以阐明PBV GI在牛中的流行病学和生物学意义，及其对动物健康和生产的影响。
**论文解读：巴西奶牛群中双RNA病毒基因I群的高流行及其与犊牛腹泻的关联性分析**
**一、研究背景与目的**
奶牛养殖业是巴西最普遍的农业活动之一，对国民经济具有重要地位。然而，新生犊牛腹泻作为一类多病原、多因素综合征，长期以来对巴西奶牛群的经济发展和生产力造成显著损失。该综合征源于犊牛与病毒、原虫、细菌等感染性病原体之间的相互作用，并受饲养管理、环境条件、营养状况及动物自身免疫状态等多重因素影响。由于新生犊牛的被动免疫最初依赖于通过初乳获得的免疫球蛋白转移，因此犊牛在出生后最初几周内对环境中的病原体尤为易感。在犊牛腹泻的病毒性病原谱中，轮状病毒A（RVA）、牛冠状病毒（BCoV）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）已被公认为主要病原，而双RNA病毒（Picobirnavirus, PBV）则被视为一种潜在的相关病原体。尽管PBV已在多种宿主中被检测到，包括哺乳动物、爬行动物、鸟类和无脊椎动物，但关于其在牛群中的感染状况、致病机制及其与腹泻之间的确切关系，目前认识仍十分有限。在巴西，仅有少数研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和/或逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术报道了牛粪便样本中PBV的检测情况。因此，开展针对PBV的分子流行病学调查和实验室诊断研究，对于阐明其在犊牛新生腹泻综合征中的作用及其在巴西牛群中的循环状况具有重要意义。本研究旨在对巴西南部圣保罗州一个封闭式高产奶牛群中，对伴有或不伴有腹泻的奶牛后备犊牛进行PBV基因I群（GI）的分子检测，以评估其感染状况及与腹泻的关联性。
**二、研究开展与结论**
研究人员于2017年3月至5月期间，在巴西圣保罗州主要奶牛产区的一个封闭式高产奶牛群中开展了一项横断面研究。该牛群拥有约1,800头泌乳荷斯坦奶牛，平均日产奶量达37升/头。研究人员共采集了122头30日龄犊牛的粪便样本，其中16头患有腹泻，106头未患腹泻。所有样本均来自该牛群，为研究提供了明确的人群队列来源。通过RT-PCR技术检测PBV GI的RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）基因片段，并对阳性扩增产物进行测序和系统发育分析，同时对PBV GI检测结果与粪便稠度之间的关联进行了统计学检验。研究结果显示，PBV GI在牻牛粪便样本中的总体检出率为54.1%（66/122），其中非腹泻犊牛占阳性样本的大多数（87.9%，58/66）。腹泻犊牛的检出率为50.0%（8/16），非腹泻犊牛为54.7%（58/106），统计学分析表明PBV GI的存在与粪便稠度之间无显著关联（p = 0.72）。测序和系统发育分析结果显示，获得的PBV GI序列与来自美国原污水的序列具有最高的核苷酸（nt）一致性（93.4%），与来自印度和美国的两个人源序列具有87.8%–89.8%的nt一致性，与来自中国的猴源序列具有88.8%的nt一致性，而与该研究中纳入的15条牛源PBV序列的nt一致性仅为64.9%–72.5%。这一研究结果表明，在该高产量奶牛群中，PBV GI表现为高流行状态，但其存在与犊牛腹泻并无显著关联，提示PBV GI可能并非该牛群犊牛腹泻的主要病原，其作为原发性致病原的作用尚不明确。
**三、主要研究结果**
**3.1 PBV GI检出率**：通过RT-PCR检测，研究人员在122份犊牛粪便样本中共检出66份（54.1%）PBV GI阳性。在16份腹泻样本中检出8份阳性（50.0%），在106份非腹泻样本中检出58份阳性（54.7%）。该检出率高于Navarro等（2018）报道的23.4%和Chagas等（2024）报道的13%，但低于Takiuchi等（2016）在巴西奶犊牛中报道的62.5%。该结果表明PBV GI在该牛群中呈现较高的循环水平。
**3.2 PBV GI与粪便稠度的关联性分析**：通过卡方检验（χ2）对PBV GI检出与粪便性状（腹泻 vs. 非腹泻）之间的关联性进行分析，结果显示p值为0.72，未达到统计学显著水平。这一结果与Takiuchi等报道的73.3%腹泻样本阳性率及Navarro等报道的27.8%腹泻样本阳性率呈现出异质性，进一步支持PBV GI的检出与犊牛腹泻之间缺乏一致性的关联结论。
**3.3 测序与系统发育分析**：研究人员选取了两个代表性RT-PCR扩增产物进行测序，但仅有命名为W1430的一条序列获得了足够的质量用于分析。系统发育分析显示该序列聚集在PBV GI分支内，与来自原污水、人类和猴源的序列表现出较高的nt一致性，而与牛源PBV序列的nt一致性较低。这一发现提示该牛源PBV序列可能并非典型的牛源毒株，反映了PBV的高度遗传多样性。
**四、讨论与结论**
本研究在讨论部分指出，PBV在54.1%的粪便样本中被检出，证实了PBV GI在所研究的高产奶牛群内存在循环。然而，在非腹泻犊牛中同样检测到较高比例的PBV阳性（54.7%），表明该病毒可在无症状动物中循环。尽管在腹泻样本中检测到了PBV GI，但由于腹泻样本均未检出轮状病毒A和牛冠状病毒，且统计学分析未发现PBV与腹泻间的显著关联，因此无法在评估的犊牛中建立PBV与腹泻之间的明确因果关系。系统发育分析结果揭示所获牛源PBV序列与人类和原污水来源的序列具有更高的一致性，提示该毒株可能具有跨物种传播或共同来源的特征，凸显了PBV的遗传多样性和复杂性。同时，已有研究在牛鼻咽拭子样本中检测到PBV，提示该病毒可能存在呼吸道的组织嗜性。然而，目前关于PBV的生物学特性、致病机制及其在牛群中的流行情况的研究仍然十分匮乏。
研究结论总结如下：本研究利用靶向GI的RT-PCR扩增和扩增子测序方法，在伴有和不伴有腹泻的后备犊牛粪便样本中检出了PBV的RNA。结果证实了PBV GI在巴西圣保罗州一个高产奶牛群中的循环。最终，本研究证明了PBV GI在奶牛犊牛中的高流行与其新生腹泻无显著关联。
