《Neurochemical Research》：Pathophysiological Role of Perivascular Macrophages in Blood–Brain Barrier Dysfunction Induced by Cerebral Hypoperfusion in Mice
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本研究探讨了位于脑血管旁的血管周围巨噬细胞（PVMs）在脑血流量（CBF）降低诱导的血脑屏障（BBB）功能障碍中的作用。研究人员利用双侧颈动脉狭窄（BCAS）小鼠模型观察脑低灌注，并通过氯膦酸盐脂质体考察了对PVM富集的巨噬细胞群体进行药物清除的效果。结果表明
本研究探讨了位于脑血管旁的血管周围巨噬细胞（PVMs）在脑血流量（CBF）降低诱导的血脑屏障（BBB）功能障碍中的作用。研究人员利用双侧颈动脉狭窄（BCAS）小鼠模型观察脑低灌注，并通过氯膦酸盐脂质体考察了对PVM富集的巨噬细胞群体进行药物清除的效果。结果表明，脑低灌注显著增加BBB通透性，而清除PVM富集的巨噬细胞群体可减轻这种渗漏。机制分析提示，PVM相关反应可能与周细胞标志物表达降低、星形胶质细胞活化以及MMP-2/9表达升高有关。此外，清除PVM富集的巨噬细胞群体可抑制基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9的上调。这些发现提示，PVM富集的巨噬细胞群体参与脑低灌注后早期BBB功能障碍，其机制可能涉及周细胞相关血管完整性改变、星形胶质细胞活化以及MMP-2/9相关的紧密连接重塑。这些结果为了解可能促进低灌注相关BBB功能障碍及后续小血管病变的血管炎症机制提供了见解。
血管周围巨噬细胞（PVMs）是定居于脑血管周围间隙的免疫细胞，近年来被认为可能参与血脑屏障（BBB）的调控。BBB功能不仅受内皮细胞调控，还受周细胞、星形胶质细胞等血管周围细胞影响。脑血流量（CBF）降低可导致BBB破坏，进而诱发慢性炎症、白质病变和认知功能减退，但PVMs在其中是否发挥作用尚不清楚。为此，研究人员在《Neurochemical Research》发表论文，利用双侧颈动脉狭窄（BCAS）小鼠模型模拟脑低灌注，通过氯膦酸盐（CLO）脂质体清除PVM富集的巨噬细胞群体，探讨PVMs在BBB功能障碍中的病理生理机制。
研究人员选用成年雄性C57BL/6J小鼠（11–13周龄，购自日本SLC株式会社），于BCAS术前3天侧脑室注射CLO脂质体或PBS脂质体。主要技术方法包括：BCAS手术建立脑低灌注模型；激光散斑血流成像测定CBF；尾静脉注射伊文思蓝（EB）检测BBB通透性；免疫荧光染色和图像分析定量CD206、CD163、Iba1、PDGFRβ等；分离脑微血管后进行Western blot检测紧密连接蛋白和PDGFRβ、GFAP；qRT-PCR检测Mmp-2、Mmp-9及Tjp1、Cldn5、Ocln mRNA；H&E染色排除明显缺血性神经元损伤；采用双因素方差分析和Tukey事后检验进行统计。
研究结果包含以下几个部分。
**BCAS术后24小时CBF下降**：激光散斑血流成像显示，与假手术组相比，BCAS术后24小时CBF降至约60%，证实脑低灌注模型成功建立。
**CD206和CD163阳性血管周围细胞在CLO注射后及BCAS术后24小时减少**：免疫荧光和Western blot显示，CLO处理显著降低CD206和CD163阳性面积及CD206蛋白水平，而Iba1阳性小胶质细胞无明显改变，表明PVM富集的巨噬细胞群体被有效清除，且该处理未引起小胶质细胞形态学激活。
**清除PVM富集巨噬细胞群体减轻BBB功能障碍**：EB渗漏实验显示，BCAS术后脑皮质EB外渗较假手术组显著增加；CLO清除PVM富集巨噬细胞群体后，BCAS小鼠的EB外渗显著减少，说明PVMs参与脑低灌注诱导的BBB通透性升高。
**清除PVM富集巨噬细胞群体影响PDGFRβ、GFAP及MMP-2/9表达**：免疫荧光和Western blot显示，BCAS导致周细胞标志物血小板衍生生长因子受体β（PDGFRβ）阳性面积和蛋白水平下降，CLO处理可逆转该下降；BCAS使胶质纤维酸性蛋白（GFAP）蛋白水平升高，CLO处理抑制该升高；qRT-PCR显示BCAS使Mmp-2和Mmp-9 mRNA水平升高，CLO处理也显著抑制这些上调。提示PVMs可能通过影响周细胞相关血管完整性、星形胶质细胞活化及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）/MMP-9表达参与BBB损伤。
**清除PVM富集巨噬细胞群体减轻紧密连接相关蛋白变化**：Western blot显示ZO-1蛋白水平在各组间无差异；BCAS术后微血管中claudin-5和全长occludin蛋白水平升高，血浆中55-kDa occludin片段增加；CLO处理可抑制这些升高。然而Tjp1、Cldn5、Ocln mRNA水平无显著差异，提示这些变化并非转录上调，而可能涉及翻译后加工或降解过程。
讨论部分指出，CBF下降至约60%与既往研究一致；CLO给药方案在术后24小时仍能维持PVM清除效果。PVMs清除减轻EB渗漏、恢复PDGFRβ水平、抑制GFAP上调及MMP-2/9表达，提示PVMs可能通过调控周细胞-星形胶质细胞-基质金属蛋白酶轴参与BBB破坏。研究也承认局限性：仅使用雄性小鼠，无法评估性别差异；快速CBF降低可能引发类似急性缺血的炎性反应，尽管H&E未见明显缺血性神经元损伤；MMP-2/9的确切细胞来源未确定；CLO可能影响其他吞噬性巨噬细胞群体。
研究结论为：PVM富集的巨噬细胞群体与CBF降低后的BBB功能障碍相关，可能通过改变周细胞相关血管完整性、星形胶质细胞活化以及MMP-2/9相关的紧密连接重塑来发挥作用。这些发现为理解低灌注相关BBB功能障碍及后续小血管病变的血管炎症机制提供了新见解。
