《SKIN RESEARCH AND TECHNOLOGY》：Combined Effect of Silybin and Sodium Acetylated Hyaluronate on UV-Induced Photoaging
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暴露于太阳紫外线（UV）辐射是皮肤光老化的主要原因，其特点是真皮中胶原蛋白水平降低。水飞蓟宾和乙酰化透明质酸钠（HA）都是潜在的抗衰老化合物。然而，单独使用时，这两种制剂均显示出有限的抗衰老功效。本研究旨在探讨水飞蓟宾和HA对UV诱导的皮肤光老化的联合作用，并
暴露于太阳紫外线（UV）辐射是皮肤光老化的主要原因，其特点是真皮中胶原蛋白水平降低。水飞蓟宾和乙酰化透明质酸钠（HA）都是潜在的抗衰老化合物。然而，单独使用时，这两种制剂均显示出有限的抗衰老功效。本研究旨在探讨水飞蓟宾和HA对UV诱导的皮肤光老化的联合作用，并阐明其潜在机制。在本研究中，评估了水飞蓟宾和HA在一系列浓度下、有无UV暴露时的细胞毒性。研究人员量化了水飞蓟宾和HA处理后基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、I型胶原蛋白（Col I）和III型胶原蛋白（Col III）的mRNA水平，以研究其促进胶原蛋白合成和抑制降解的作用。还评估了每种化合物的还原性和活性氧（ROS）清除活性。随后在单独和联合处理后测量胶原蛋白含量。水飞蓟宾在浓度达到0.01%时表现出明显的细胞毒性，而HA即使在1%浓度下也基本无毒性。UV照射略微增加了水飞蓟宾和HA的细胞毒性。值得注意的是，水飞蓟宾通过下调MMP-1 mRNA表达有效抑制胶原蛋白降解，尽管它未能上调Col I和III mRNA水平。相比之下，HA不抑制MMP-1 mRNA表达，且在较高浓度下略微升高其表达，但HA能有效促进Col I和III mRNA表达。因此，水飞蓟宾和HA联合处理导致MMP-1 mRNA水平下调和Col I及III mRNA水平上调。水飞蓟宾还表现出高还原性，因此提供了强大的ROS清除能力。由于MMP-1合成主要由ROS诱导，水飞蓟宾表现出强烈的MMP-1抑制作用。同时，HA由于其低还原性而显示出较弱的ROS清除能力。然而，水飞蓟宾和HA的组合抑制了胶原蛋白降解（主要通过水飞蓟宾）并促进了Col I和III mRNA表达及蛋白质合成（主要通过HA），从而提高了总体胶原蛋白水平。本研究揭示了水飞蓟宾和HA共同增加真皮胶原蛋白水平的互补机制——水飞蓟宾通过保护现有胶原蛋白免受降解，而HA通过促进胶原蛋白合成——指导它们在化妆品中的联合使用以保护皮肤免受UV诱导的光老化。
太阳紫外线辐射是皮肤老化的主要环境因素。其中，长波紫外线（UVA，320–400 nm）占到达地表UV辐射的约95%，可穿透至皮肤真皮深层，抑制成纤维细胞胶原蛋白合成并促进其降解，导致细胞外基质（ECM）结构支撑丧失，进而引发皱纹等光老化外观。已知多种化合物通过增加皮肤胶原蛋白水平来对抗光老化，依据作用机制可分为促进胶原合成与抑制胶原降解两类。水飞蓟宾是从水飞蓟（*Silybum marianum*）种子提取物中分离的主要黄酮木脂素，已证实可通过下调基质金属蛋白酶（MMPs）表达抑制胶原降解；而乙酰化透明质酸钠（HA）则被认为能促进胶原合成。然而，这两种化合物单独使用时抗衰老效果均有限。基于二者潜在的互补机制，研究人员假设联合应用水飞蓟宾与HA可更有效地提升真皮胶原蛋白含量，并对此进行了系统验证。该研究使用人皮肤成纤维细胞（HSF）作为体外模型，评估了单用及联用两种化合物在紫外线（UV）照射下的细胞毒性、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、I型胶原蛋白（Col I）和III型胶原蛋白（Col III）的mRNA及蛋白表达、活性氧（ROS）清除能力以及还原性，以阐明其联合作用机制。
该研究采用的关键方法包括：细胞活力通过MTT比色法测定；mRNA表达水平通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测；ROS清除能力使用ROS检测试剂盒测定；还原能力通过ABTS自由基清除实验评估；胶原蛋白分泌水平通过酶联免疫吸附测定（ELISA）定量。HSF细胞购买自中国丰辉生物技术有限公司。所有实验均重复三次，数据以平均值±标准差表示，采用单因素方差分析和双尾Student t检验进行统计。
主要研究结果如下：
3.1 细胞活力分析：在不进行UV照射时，水飞蓟宾浓度低于0.005%（w/w）时几乎无细胞毒性，浓度超过0.05%时细胞存活率趋近于0；在20 J/cm2 UVA照射后，水飞蓟宾的细胞毒性增强，0.005%即显示明显毒性，但0.01%浓度下仍有大部分细胞存活。HA在1%浓度下无论有无UV照射均未引起显著细胞毒性，细胞存活率始终高于50%。联合处理时，无UV照射条件下0.1% HA + 0.001%水飞蓟宾无显著毒性，但UV照射会略微增强该混合物的细胞毒性。基于此，后续实验选取了0.01% HA + 0.0001%水飞蓟宾、0.05% HA + 0.0005%水飞蓟宾和0.1% HA + 0.001%水飞蓟宾三个联合浓度组合。
3.2 水飞蓟宾与HA对MMP、Col I和Col III mRNA表达的联合影响：qPCR结果显示，水飞蓟宾可显著抑制UV诱导的MMP-1 mRNA表达，即使在1 ppm浓度下也能抑制约60%；而HA不仅不能抑制MMP-1表达，高浓度时反而使其略高于UV照射对照组。与此相反，HA能有效上调Col I和Col III的mRNA水平，水飞蓟宾则无此作用。联合处理同时实现了MMP-1下调以及Col I和Col III上调，且胶原mRNA水平高于HA单独处理组，这可能是由于水飞蓟宾改善细胞活力后间接增强了HA的促合成效应。
3.3 ROS清除能力分析：经H?O?处理后细胞ROS水平显著升高，水飞蓟宾在0.0001%浓度下即有效抑制ROS产生，且抑制作用呈浓度依赖性；HA清除ROS的能力有限，推测是因为HA仅在细胞表面形成保护层，无法直接消除胞内ROS。联合使用水飞蓟宾和HA可显著降低ROS水平，与二者对MMP-1表达的抑制作用一致。
3.4 ABTS清除能力分析：HA的ABTS自由基清除能力较弱，浓度低于0.005%时几乎没有清除作用；水飞蓟宾的ABTS清除能力很强，呈浓度正相关。由于水飞蓟宾分子结构含有多个酚羟基，赋予其强还原性，这解释了其在ROS清除和MMP抑制方面的效力。
3.5 胶原蛋白合成的增强：ELISA检测结果表明，与单独处理相比，水飞蓟宾与HA联合处理可显著增加Col I和Col III的蛋白分泌水平。HA单独处理即能显著上调两种胶原蛋白水平，而水飞蓟宾单独处理与UV照射对照组相比无统计学显著差异，提示水飞蓟宾并非直接促进胶原合成，而主要通过抑制MMP介导的胶原降解来保护现有胶原。但值得注意的是，HA显著提高胶原mRNA水平后，蛋白水平的增幅相对温和，可能由培养时间较短、转录后调控以及胶原蛋白加工分泌所需时间所致。
讨论部分强调，同时采用“促进胶原合成”和“抑制胶原降解”两种途径是实现互补联合抗衰老效应的更优策略。该研究以HA作为促进合成成分、水飞蓟宾作为抑制降解成分，验证了这种联合策略的有效性，并可推广至其他具有类似互补机制的成分组合。研究结论指出，水飞蓟宾与HA在成纤维细胞胶原稳态中发挥互补作用：水飞蓟宾主要通过清除ROS、抑制MMP-1表达来保护现有胶原蛋白免于降解；HA则通过上调Col I和Col III转录进而促进新生胶原蛋白合成。两者联合使用可显著提高总体胶原蛋白水平，因此可作为关键活性成分共同添加于化妆品中，用于防护UV诱导的皮肤光老化。
