整合分子与影像学见解：垂体神经内分泌肿瘤中兰尼碱受体2（RyR2）表达、细胞角蛋白18状态与常规MRI表现的相关性研究

《International Journal of Molecular Sciences》：Integrating Molecular and Imaging Insights: Ryanodine Receptor 2 (RyR2) Expression, CK18 Status, and Conventional MRI Findings in Pituitary Neuroendocrine Tumors

　　

摘要翻译：兰尼碱受体2（RyR2）在癌症生物学中日益被认为是重要的调节因子。既往研究表明，RyR2表达与患者生存相关，尽管其在肿瘤发生中的确切作用仍不明确。RyR2表达升高与较差的生存结局相关，而基因沉默或药理抑制（如使用S107）在体外和体内模型中均已被证明可减少癌细胞转移。细胞角蛋白18（CK18）作为一种关键的上皮标志物，与垂体神经内分泌肿瘤（PitNETs）的肿瘤分化、激素表型及临床行为相关，反映潜在的细胞骨架组织。CK18表达的变异与不同的腺瘤亚型相关联，并可能为肿瘤侵袭性提供见解。本探索性研究调查了RyR2表达、CK18状态与垂体肿瘤常规MRI表现之间的关联。未评估定量T2加权信号强度和影像组学特征。本探索性观察研究在2017年1月至2026年1月期间进行前瞻性患者招募，并于2016年12月获得伦理批准。使用QuPath v0.6.0对免疫组织学样本中的RyR2表达进行定量。CK18免疫染色按照制造商方案使用Dako Omnis系统进行。24名患者的常规MRI结果可供使用，并进行了回顾性审查。使用SPSS/W 31.0进行统计分析。RyR2表达与性别、激素活性、肿瘤大小、侵袭性、复发或评估的常规MRI表现之间未观察到统计学显著关联（所有p > 0.05）。唯一具有统计学显著性的发现是CK18阴性肿瘤中的RyR2表达高于CK18阳性肿瘤（中位数（IQR）：2.49%（18.36%）对0.06%（0.39%）；p = 0.006；r = 0.47）。在CK18阴性肿瘤中观察到较高的RyR2表达。鉴于探索性设计和有限的样本量，该关联应被视为产生假说，并需要在更大的独立队列中验证。

论文解读：垂体神经内分泌肿瘤（PitNETs）约占所有颅内肿瘤的10%–25%，在普通人群中的检出率可达10%。尽管组织学上多为良性，但部分亚群表现出临床侵袭性行为，给治疗带来挑战。PitNETs按激素分泌状态分为功能性和非功能性，其中泌乳素瘤占比最大，其次为非功能性腺瘤、生长激素分泌性肿瘤及促肾上腺皮质激素产生性病变。肿瘤大小分类中，微腺瘤（<10 mm）略多于大腺瘤（≥10 mm）。大腺瘤通常临床无功能性，多见于男性，症状多来自邻近结构受压或垂体功能减退。兰尼碱受体2（RyR2）是心肌细胞中细胞内Ca²⁺释放的关键调节因子，定位于内质网/肌浆网，介导兴奋-收缩耦联。RyR2的异常表达或调节与多种恶性肿瘤相关，包括非小细胞肺癌、结直肠癌、食管癌和乳腺癌等。然而，RyR2在垂体腺瘤中的表达及其临床病理学意义此前尚未得到充分表征。细胞角蛋白18（CK18）是一种中间丝蛋白，与CK8共表达，除维持细胞骨架完整性外，还参与凋亡、细胞周期进程和细胞信号传导的调节。在PitNETs中，CK18免疫组织化学是组织病理学分类的既定工具，可特征性地标记稀疏颗粒型生长激素细胞肿瘤中的纤维小体和促肾上腺皮质激素细胞腺瘤中的Crooke细胞改变。磁共振成像（MRI）是PitNETs诊断评估的金标准，但常规MRI解读主要依赖放射科医生的经验，存在观察者间变异和遗漏细微病理特征的风险。该探索性研究旨在调查RyR2表达、CK18状态与常规MRI定义的肿瘤大小、扩展和侵袭性之间的关联。

研究人员在获得考纳斯区域生物医学研究伦理委员会批准后，于2017年1月至2026年1月在立陶宛健康科学大学医院眼科和神经外科前瞻性招募患者，共纳入35例符合标准的PitNET病例。RyR2表达通过QuPath v0.6.0软件对免疫组织化学样本进行定量评估，使用抗RyR2单克隆抗体（克隆EPR26288-70）在Roche Ventana BenchMark ULTRA PLUS平台上染色。CK18免疫染色采用Dako Omnis自动化染色系统，使用抗CK18单克隆抗体（克隆DC-10），由病理医生依据WHO内分泌和神经内分泌肿瘤分类进行评估。常规MRI数据由经验丰富的放射科医生进行回顾性审查，评估肿瘤大小、鞍上扩展、鞍旁扩展、海绵窦侵袭（Knosp分级）等常规形态学特征。统计分析采用SPSS/W 31.0，使用Mann–Whitney U检验和Fisher精确检验，效应量以r表示。

研究结果显示，在35例患者中，男性15例（42.9%），女性20例（57.1%）。大腺瘤22例（62.9%），微腺瘤13例（37.1%）。肿瘤复发16例（45.7%），无复发19例（54.3%）。侵袭性肿瘤21例（60.0%），非侵袭性14例（40.0%）。激素失活腺瘤23例（65.7%），激素活性腺瘤12例（34.3%）。RyR2表达与肿瘤大小、侵袭性、激素活性、复发及性别之间均无统计学显著关联（p均>0.05）。在33例具有CK18数据的患者中，CK18阴性肿瘤的RyR2中位百分数显著高于CK18阳性肿瘤（中位数（IQR）：2.49%（18.36%）对0.06%（0.39%），p=0.006，效应量r=0.47）。在24例具有MRI数据的患者中，RyR2表达与鞍上扩展、鞍旁扩展、鞍旁颅内扩展程度、副海绵窦侵袭（Knosp分级）及下鞍旁扩展均无统计学显著关联（p均>0.05）。CK18状态与各项MRI发现之间也未观察到统计学显著关联（p均>0.05）。

讨论部分指出，RyR2作为细胞内Ca²⁺释放通道，参与内质网/肌浆网钙稳态调节。细胞内Ca²⁺信号紊乱与自噬、增殖和癌症进展有关。在癌症中，RyR表达临床相关性具有背景依赖性：乳腺癌中RyR表达与肿瘤分级呈负相关，甲状腺癌中低RyR2表达与不良临床病理特征和较差预后相关，而结直肠癌中RyR2高表达与较短生存时间相关。既往研究还表明，CK18免疫组化模式与PitNETs的临床特征显著相关，侵袭性PitNETs更常表现为CK18阴性反应，激素失活肿瘤中CK18阴性率也更高。本研究观察到CK18阴性肿瘤中RyR2表达显著升高，但这一关联仅为免疫组织化学变量之间的相关性，不能证明存在因果联系。鉴于探索性设计和样本量有限，该结果应视为产生假说，需在更大的独立队列中验证，并需要专门的功能研究确定CK18与RyR2之间是否存在生物学关系。

研究结论：在35例PitNET患者队列中，RyR2表达与核心临床特征（肿瘤大小、侵袭性、激素活性、复发或性别）及评估的常规MRI表现均无统计学显著关联。唯一具有统计学显著性的发现是CK18阴性肿瘤中的RyR2表达高于CK18阳性肿瘤。鉴于探索性设计、有限样本量和缺乏功能验证，该关联应被视为产生假说。需要更大的独立队列来确认这些发现并确定其生物学意义。局限性包括队列规模较小（n=35），且仅部分患者（n=24）具有可用的MRI数据，降低了统计效力；无法获取匹配的正常垂体组织；MRI亚组样本量过小；未进行多重比较校正；MRI分析限于常规定性形态学特征，未进行定量T2信号强度、影像组学、纹理、弥散或体积分析；RyR2评估基于半定量的免疫组化百分比估计，可能受瘤内异质性和技术变异影响；未进行qPCR或Western blot独立验证，也未进行RYR2基因特征分析或功能实验。未来需要多中心、预设样本量计算和分层良好的更大队列研究来验证这些发现。