全细胞噬菌体展示筛选联合CRISPR-Cas9文库筛选发现急性髓系白血病治疗候选抗体及抗原

《Antibody Therapeutics》：Discovery of Candidate Antibodies and Antigens for Acute Myeloid Leukemia Therapy by Combining Whole-Cell Phage Display Selection and CRISPR-Cas9 Library Screening

　　

摘要

背景

急性髓系白血病（AML）仍然难以治疗，通常需要强化疗。与其他血液系统恶性肿瘤相比，针对 AML 的有效抗体疗法和细胞免疫疗法的发展受到了合适靶抗原稀缺的限制。

方法

我们应用了一种基于噬菌体展示的全细胞筛选方法，其中 Fab-噬菌体被生物素化并捕获，随后进行下一代测序（NGS）、生物信息学和统计分析。靶点去卷积是使用 CRISPR-Cas9 敲除文库、抗原阴性细胞的流式细胞分选以及基于 NGS 的 gRNA 分析进行的。选定的候选物使用 AML 患者原代细胞和嵌合抗原受体（CAR）-T 细胞实验进一步评估。

结果

我们鉴定出 28 种独特单克隆抗体，优先结合 AML 细胞系。基于 CRISPR-Cas9 的靶点去卷积实现了三种同源抗原的高效鉴定。选定的主要候选物通过染色 AML 患者原代细胞进行验证，并被工程化为 CAR 构建体。针对已鉴定抗原的 CAR-T 细胞介导了对 AML 细胞系和 AML 原代细胞的有效清除。

结论

这种综合的基于抗体的抗原发现和验证方法可能会加速针对 AML 和其他适应症的单克隆抗体和 CAR 免疫疗法的发展。