灯盏生脉方通过HIF-1α/VEGFA通路对氧糖剥夺/复氧损伤bEND.3细胞血管新生的促进作用及相关机制初探

　　

摘要: 采用血清药理学研究方法探讨灯盏生脉方(Dengzhan Shengmai Formula,DZSM)血中移行成分促进氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)损伤小鼠脑微血管内皮细胞(bEND.3)血管新生的机制。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap-MS)技术鉴定DZSM血中移行成分;建立OGD/R损伤bEND.3细胞模型,通过CCK-8试剂盒检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)水平评估细胞活力,共聚焦显微镜检测活性氧(ROS)表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,结合划痕实验、细胞迁移实验、成管实验及内皮电阻、荧光素钠渗透性检测等,综合评价DZSM含药血清对血管新生的促进作用;Western blot法检测缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子A (HIF-1α/VEGFA)信号通路相关蛋白表达,结合分子对接筛选方中关键活性成分。结果显示,DZSM中灯盏乙素、4,5-双咖啡酰基奎宁酸、人参皂苷Rb2等12个成分为血中移行成分,体积分数为20%的DZSM含药血清为干预OGD/R损伤bEND.3细胞的最佳浓度。与对照组相比,模型组细胞活力、细胞迁移率、成管能力及通路相关特征蛋白表达均显著降低,ROS含量、细胞凋亡率显著升高(P <0.05);与模型组相比,DZSM血中移行成分干预组细胞活力、细胞迁移率、成管能力及紧密连接蛋白表达均显著升高,ROS含量、细胞凋亡率显著降低(P<0.05),且HIF-1α、VEGFA蛋白表达明显上调;分子对接结果显示,灯盏乙素等血中移行成分与HIF-1α、VEGFA靶点具有较强结合能力。结果表明,灯盏生脉方血中移行成分可促进OGD/R损伤bEND.3细胞血管新生,其机制与激活HIF-1α/VEGFA信号通路、上调相关蛋白表达密切相关。本实验按照广东药科大学实验动物福利伦理委员会指导政策严格执行(批准号:gdpulacspf2022137)。