基于网络药理学、转录组测序与实验验证探讨光甘草定抗食管癌细胞恶性表型及其作用机制

　　

摘要: 本研究旨在探讨甘草提取物光甘草定抗食管癌恶性表型及分子机制。采用CCK-8、克隆形成、划痕实验及流式细胞术检测其对KYSE150和TE1食管癌细胞株的影响,并结合转录组测序(RNA-seq)、多平台药理学预测、蛋白相互作用(PPI)网络分析、免疫印迹(WB)验证、分子对接、细胞热迁移实验(CETSA)及数据库挖掘进行系统解析。结果显示,光甘草定呈浓度依赖抑制食管癌细胞活力,KYSE150与TE1细胞48 h的IC₅₀分别为37.85和20.00 μmol·L^-1。5 μmol·L^-1光甘草定即可显著抑制克隆形成,20 μmol·L^-1处理使细胞周期阻滞于G0/G1期(比例分别达59.99%和56.68%),24 h迁移率分别降至30%与25%(P <0.000 1)。RNA-seq鉴定出2 104个差异表达基因,主要富集于铁死亡、自噬及细胞周期通路等。网络药理学整合分析筛选出66个核心靶点,PPI网络拓扑分析锁定细胞周期蛋白A2(CCNA2)、热休克蛋白90α(HSP90AA1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(MTOR)等枢纽基因,其中CCNA2与HSP90AA1在TCGA食管癌数据中协同肥胖显著影响患者预后。WB证实光甘草定可下调CCNA2、CDK2、周期素依赖性激酶1(CDK1)、蜗牛家族转录抑制因子2(SNAI2)及磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)表达,而HSP90AA1蛋白水平无明显变化。分子对接显示,光甘草定通过氢键、π-烷基及π-阴离子相互作用稳定结合CCNA2活性口袋。CETSA证实光甘草定提高CCNA2热稳定性,且蛋白酶体抑制剂MG132可阻断光甘草定诱导的CCNA2降解。DepMap与LinkedOmics数据库分析表明,CCNA2促进食管癌细胞增殖且与细胞周期进程相关。综上,光甘草定抑制食管癌细胞增殖与迁移,机制涉及细胞周期及上皮间质转化过程,CCNA2可为食管癌治疗的潜在靶点。