二甲双胍减弱高糖对HEK293细胞中MORG1表达的影响

《Current Issues in Molecular Biology》：Metformin Attenuates the High-Glucose Effect on MORG1 Expression in HEK293 Cells

　　

摘要

在1型和2型糖尿病模型中，MAPK调节因子1（MORG1）表达降低对MORG1^+/?小鼠具有肾保护作用。为探究MORG1表达的调控机制，本研究利用CRISPR/Cas9方法构建了内源性人类MORG1-荧光素酶标记的HEK293细胞，将萤火虫荧光素酶报告基因插入人类MORG1基因下游。本研究分析了20 mM D-葡萄糖对MORG1-荧光素酶活性的时间依赖性影响，并考察了20 μM二甲双胍是否影响MORG1的表达。通过CRISPR/Cas9对HEK293细胞进行基因组修饰，将萤火虫荧光素酶基因插入MORG1下游。利用嘌呤霉素筛选稳定克隆。以剂量和时间依赖方式分析D-葡萄糖浓度对MORG1表达的影响。荧光素酶测定评估MORG1的转录活性，Western blot检测蛋白表达水平，qRT-PCR评估MORG1 mRNA水平。在亲本HEK293细胞、标记HEK293细胞及TKPTS细胞中评估二甲双胍的药理学效应，上述细胞同时暴露于5.5 mM或20 mM D-葡萄糖环境中，并设置有无20 μM二甲双胍的处理组。与5.5 mM葡萄糖对照组相比，高糖显著增加荧光素酶活性和MORG1蛋白表达水平。时间进程实验表明MORG1转录受到显著诱导，蛋白水平相应升高得到证实。二甲双胍处理在24 h时显著降低葡萄糖诱导的荧光素酶活性、MORG1 mRNA水平及MORG1蛋白表达。TKPTS细胞分析显示20 mM D-葡萄糖升高Morg1 mRNA水平，而在20 μM二甲双胍存在时该诱导作用被减弱。高糖在MORG1-荧光素酶标记的HEK293细胞中诱导MORG1转录和蛋白表达的时间依赖性上调。二甲双胍减轻但不完全阻止葡萄糖诱导的MORG1 mRNA和蛋白表达。