CRISPR-Un1Cas12f1 多重基因组编辑恢复杜氏肌营养不良小鼠模型中的抗肌萎缩蛋白表达

《Molecular Therapy》：Multiplexed genome editing by CRISPR-Un1Cas12f1 restores dystrophin expression in a mouse model of Duchenne muscular dystrophy

　　

摘要

紧凑型V类CRISPR核酸酶Un1Cas12f1可与腺相关病毒（AAV）介导的基因组编辑兼容，尽管其间隔序列相邻基序（PAM）要求及多基因座编辑能力尚未明确。本研究显示，Un1Cas12f1对非经典PAM具有广泛的耐受性，包括富含嘧啶的基序，且偏好TTCR和TCTA PAM，从而扩展了基因组靶向范围。我们进一步证明，由单个转录本表达的串联sgRNA阵列支持Un1Cas12f1介导的多基因座基因组编辑，可在多达五个不同的基因组位点实现编辑。利用这一多基因座编辑能力，我们通过肌内递送编码Un1Cas12f1和CRISPR阵列的"一体化"AAV载体，成功实现了Dmd基因第23号外显子的靶向敲除。该治疗恢复了杜氏肌营养不良（DMD）小鼠模型中断裂的开放阅读框及营养不良蛋白的表达。综上所述，这些发现确立了Un1Cas12f1作为一种具有多基因座编辑能力的紧凑型CRISPR系统，并展示了其在DMD治疗中的潜力。

图形摘要