《Experimental Parasitology》：Wood creosote pretreatment of anisakid larvae attenuates extract-induced epithelial dysfunction
in vitro
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•木质煤焦油（WC）预处理减轻了异尖线虫提取物诱导的屏障功能障碍•WC预处理降低了Caco-2细胞中IL-6和IL-8的反应•该上皮效应在Caco-2细胞中未引起细胞毒性•WC调节了与异尖线虫过敏相关的一个上游上皮靶点引言食用生食或未充分加工的海洋鱼类可使人类暴露于异尖线虫第
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木质煤焦油（WC）预处理减轻了异尖线虫提取物诱导的屏障功能障碍
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WC预处理降低了Caco-2细胞中IL-6和IL-8的反应
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该上皮效应在Caco-2细胞中未引起细胞毒性
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WC调节了与异尖线虫过敏相关的一个上游上皮靶点
引言
食用生食或未充分加工的海洋鱼类可使人类暴露于异尖线虫第三期幼虫，导致异尖线虫病及寄生虫相关过敏反应（Adroher-Auroux and Benitez-Rodriguez, 2020; Audicana and Kennedy, 2008）。在日本，2024年医疗机构报告的食品中毒事件中，异尖线虫病占31.8%，其他地区也有病例报告（厚生劳动省, 2025; Nonkovic et al., 2025）。
临床表现包括胃型、肠型和胃肠过敏型（Mattiucci et al., 2013; Yamamoto et al., 2019）。冷冻可杀死幼虫，但其抗原性可依然存在，包括耐胃蛋白酶活化的Ani s 4蛋白（Rodriguez-Mahillo et al., 2008）。临床上对冷冻死幼虫的耐受也有报道（Garcia et al., 2001）。然而，减少幼虫入侵的干预措施未必能解决宿主对残余幼虫成分的反应。
上皮屏障功能障碍可促进过敏原通过并放大免疫激活（Cook-Mills and Emmerson, 2022; Yazici et al., 2023）。因此，即使没有临床低致敏性的直接证据，减轻异尖线虫提取物诱导的上皮功能障碍仍具有相关性。
木质煤焦油（WC）是青龙丸的主要活性成分，富含低分子量酚类物质（Ataka et al., 2005; Ogata and Baba, 1989）。WC及其成分可减少异尖线虫幼虫的运动活性，在较高浓度下具有杀幼虫作用（Ogata et al., 2020; Ogata and Tagishi, 2021; Pereira et al., 2025）。这些研究并未确立WC预处理是否改变幼虫提取物所触发的宿主应答级联中的上游上皮事件。
Caco-2模型显示，异尖线虫产物可诱导上皮炎症和屏障功能障碍（Carballeda-Sangiao et al., 2020; Speciale et al., 2017; Bellini et al., 2022）。由于我们的体系中仅含上皮细胞，IL-6和IL-8被用作上皮炎症信号标记物，而非临床致敏性指标。
本研究比较了两种粗提取物：一是将解冻幼虫在不含WC的Dulbecco磷酸盐缓冲液（D-PBS）中孵育制备的提取物（CE）；二是幼虫经WC处理后均质化制备的配对提取物（CEWC）。我们假设，WC预处理会减轻所得幼虫来源提取物所诱导的上皮屏障破坏和炎症信号。
章节摘要
异尖线虫幼虫的采集
活异尖线虫幼虫从新鲜日本鲭（Scomber japonicus）的脏器中分离获得，该鱼捕获于FAO主要渔业区61（西北太平洋）并在当地购买。脏器在0.7% HCl和0.1%胃蛋白酶（Nacalai Tesque, 京都, 日本）中于24 ± 1 °C消化24 h，期间以400 rpm搅拌（Sanchez-Alonso et al., 2021）。将幼虫分离、清洗，并形态学分类为Anisakis I型第三期幼虫。未进行分子物种鉴定。由于
CE和CEWC的蛋白产量相似且无细胞毒性
蛋白提取产量约为5–20 mg/mL，具体取决于处理的幼虫数量，CE和CEWC获得相似的总蛋白浓度。在CCK-8检测中，两种提取物在0.2–2.0 mg/mL浓度下均未降低细胞活力。在每个匹配浓度下，使用双尾非配对t检验比较CE和CEWC，未发现显著差异（补充图S1）。
WC预处理减轻了提取物诱导的屏障功能障碍
暴露于CE、CEWC或LPS的Caco-2单层细胞相较于溶剂对照组，LY通透量增加
讨论
本研究将原始问题从临床致敏性重新定义为上皮反应。已有报道表明，异尖线虫产物可改变肠道上皮屏障功能并引发Caco-2细胞的炎症反应（Carballeda-Sangiao et al., 2020; Speciale et al., 2017; Bellini et al., 2022）。我们的数据进一步证明，均质化前进行WC预处理与较低的屏障功能障碍和较低的上皮IL-6及IL-8反应相关。
CRediT作者贡献声明
Caroline Donzeli Pereira：撰写——初稿、可视化、方法学、调查、概念化。Ming Chen：撰写——审阅与编辑、可视化、验证、方法学、调查、形式化分析、数据整理、概念化。Takanori Miura：撰写——审阅与编辑、指导、项目管理、方法学、形式化分析、概念化
未被引用的参考文献
Borkowski et al., 2014; Bustin et al., 2009; García et al., 2001; 厚生劳动省, 2025; Rodríguez-Mahillo et al., 2008; Saelens et al., 2022; Stryinski et al., 2025; Tavel et al., 2010; Vida?ek et al., 2009。
利益冲突声明
Caroline Donzeli Pereira和Ming Chen为太田药品株式会社员工。Takanori Miura担任太田药品株式会社研究顾问，并已从太田药品株式会社获得顾问费。
资金支持
本研究由太田药品株式会社资助。未从公共、商业或非营利资助机构获得其他专项资助。
利益冲突声明
Caroline Donzeli Pereira和Ming Chen为太田药品株式会社员工。Takanori Miura担任太田药品株式会社研究顾问，并已从太田药品株式会社获得顾问费。
致谢
作者感谢大阪大学医学研究生院分子生物化学与临床调查系宫好秀树教授对细胞实验的支持。
Caroline Donzeli Pereira|Ming Chen|Takanori Miura
