《Frontiers in Cellular and Infection Microbiology》：A nanoemulsion-adjuvanted trivalent neuraminidase vaccine confers cross-protection against divergent influenza viruses
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## 摘要专业翻译
开发能够诱导广泛保护的通用流感疫苗（universal influenza vaccine，UIV）仍是关键的公共卫生优先事项。神经氨酸酶（neuraminidase，NA）作为流感病毒中相对保守的表面抗原，是UIV设计中有前景的靶标。在本
## 摘要专业翻译
开发能够诱导广泛保护的通用流感疫苗（universal influenza vaccine，UIV）仍是关键的公共卫生优先事项。神经氨酸酶（neuraminidase，NA）作为流感病毒中相对保守的表面抗原，是UIV设计中有前景的靶标。在本研究中，研究人员通过杆状病毒-昆虫细胞表达系统（baculovirus-insect cell expression system，BEVS）生产了与WHO推荐的2024–2025年度毒株（H1N1、H3N2和B/Victoria）匹配的全长三价NA蛋白。在小鼠中对N2NA（源自H3N2）的免疫原性评估表明，与无佐剂疫苗相比，纳米乳（nanoemulsion，NE）佐剂显著增强了神经氨酸酶抑制（neuraminidase-inhibiting，NI）抗体滴度、CD4 T细胞应答以及分泌IL-2、IL-4和IFN-γ的淋巴细胞数量。添加NE佐剂的单价N1 NA和BV NA疫苗同样诱导了更强的NI抗体应答和抗病毒保护。此外，NE佐剂三价NA疫苗（N1+N2+BV）诱导了强效的体液免疫和细胞免疫，并在小鼠中对两株H1N1、两株B/Victoria和一株H5N1毒株提供了有效保护。综上所述，这些发现支持基于多价NA疫苗策略的有效性，并突显其作为候选UIV的巨大潜力。
## 论文解读
### 一、研究背景与目的
流感病毒在全球每年造成较高的发病率和死亡率，除季节性流行外，大流行威胁更为严峻。目前许可的流感疫苗主要以血凝素（hemagglutinin，HA）为主要抗原组分，通过诱导血凝抑制抗体提供保护，但HA球状头部高度变异，需每年更新疫苗株，长期效力受限。神经氨酸酶（neuraminidase，NA）进化速率远慢于HA头部，其酶活性位点在不同亚型间高度保守，是通用流感疫苗（universal influenza vaccine，UIV）设计的有前景靶标。已有证据表明抗NA抗体可中和病毒并与人体保护相关。本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统（baculovirus-insect cell expression system，BEVS）生产与WHO 2024–2025年度推荐毒株匹配的全长三价NA蛋白，系统评估纳米乳（nanoemulsion，NE）佐剂对NA疫苗免疫原性和交叉保护效力的增强作用。
### 二、研究内容与主要结论
研究人员在BALB/c小鼠模型中系统评估了N2NA（源自H3N2）、N1NA（源自H1N1）、BVNA（源自B/Victoria）及三价NA组合（N1+N2+BV）的免疫原性和保护效力。结果显示，NE佐剂显著增强NA特异性结合抗体和神经氨酸酶抑制（neuraminidase-inhibiting，NI）功能性抗体滴度，促进CD3+CD4+和CD3+CD8+ T细胞应答及IL-2、IL-4、IFN-γ分泌。NE佐剂三价NA疫苗对两株H1N1、两株B/Victoria和一株H5N1毒株均提供有效保护，验证了多价NA疫苗策略的有效性，为UIV研发提供了实验依据。
### 三、关键技术方法
主要技术方法包括：采用BEVS表达并纯化全长重组NA蛋白；还原/非还原SDS-PAGE及PNGase F消化表征蛋白纯度、糖基化修饰和寡聚状态；fetuin-based ELISA检测NA酶活性；ELISA检测NA特异性结合抗体；NI试验检测功能性NI抗体滴度；流式细胞术分析脾脏CD3+CD4+和CD3+CD8+ T细胞亚群比例；ELISpot定量分泌IL-2、IL-4和IFN-γ的淋巴细胞；攻毒保护实验采用10×LD50病毒滴鼻攻毒，监测14天内体重变化和存活率。攻毒用流感病毒株涵盖H1N1（A/Victoria/4897/2022、A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019）、B/Victoria（B/Austria/1359417/2021、B/Washington/02/2019）和H5N1（A/Vietnam/1194/2004），均来源于英国国家生物标准与检定所（National Institute for Biological Standards and Control，NIBSC）。
### 四、研究结果
**3.1 重组NA蛋白具有酶活性**
还原SDS-PAGE显示三种重组蛋白均在约65 kDa处呈单一清晰条带，PNGase F消化后分子量移至约58 kDa，证实广泛的N-连接糖基化修饰；非还原条件下蛋白以大于180 kDa的高分子量寡聚体形式存在。fetuin-based酶活性实验证实重组NA能有效切割fetuin末端唾液酸残基，表明蛋白具有天然构象和功能性生物学活性。
**3.2 NE佐剂初免-加强增强N2NA疫苗体液和细胞免疫**
ELISA结果显示初免-加强（prime-boost，P+B）策略诱导的抗体水平显著高于单次免疫，加入NE佐剂后进一步大幅增强，N2NA+NE（P+B）组终点抗体滴度约为无佐剂P+B组的20倍，NI抗体趋势一致。流式细胞术显示该组CD3+CD4+和CD3+CD8+ T细胞比例均达最高。ELISpot结果显示该组IL-2、IL-4和IFN-γ分泌淋巴细胞数量均最高且三者水平相当，提示诱导了平衡的Th1/Th2细胞免疫应答和最佳免疫效果。
**3.3 NE佐剂呈剂量依赖性增强N2NA疫苗免疫原性**
在0.2、1和5 μg三个剂量下，抗体水平随剂量增加而显著升高，NE佐剂组在同剂量下均显著高于无佐剂组。1 μg N2NA+NE诱导的抗体滴度高于5 μg无佐剂N2NA组。CD
