《Journal of Investigative Dermatology》：Postzygotic
NRAS Variants and Subsequent Copy-Neutral Loss of Heterozygosity Underlie Speckled-Pattern Formation in Nevus Spilus–Type Congenital Melanocytic Nevus
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摘要斑痣型先天性黑色素细胞痣（NS-CMN）的特征是背景棕色斑疹上叠加黑色斑疹或斑块；然而，人类皮肤中斑点状模式形成的机制仍不清楚。我们对三个 NS-CMN 病例进行了临床病理学和分子分析，使用了来自背景成分和叠加成分的多处活检。在提取 DNA 前，将表皮和真皮分开，随后进行
摘要 斑痣型先天性黑色素细胞痣（NS-CMN）的特征是背景棕色斑疹上叠加黑色斑疹或斑块；然而，人类皮肤中斑点状模式形成的机制仍不清楚。我们对三个 NS-CMN 病例进行了临床病理学和分子分析，使用了来自背景成分和叠加成分的多处活检。在提取 DNA 前，将表皮和真皮分开，随后进行全外显子组测序、NRAS 密码子 13 和 61 的桑格测序以及单核苷酸多态性芯片分析。在一例患者中，分别从表皮和真皮区室培养黑色素细胞谱系细胞并进行遗传分析。背景病变包含散在的梭形 S100/Melan-A 阳性真皮黑色素细胞，叠加病变包含痣细胞的真皮巢。在背景棕色斑疹的 11 份真皮来源 DNA 样本中的 10 份，以及叠加黑色斑疹/斑块的 16 份真皮来源 DNA 样本中的 16 份，通过桑格测序检测到受精后 NRAS 变异。在叠加病变的 16 份真皮样本中的 14 份确认了涵盖 NRAS 位点的拷贝中性杂合性缺失（cn-LOH），但在背景病变的样本中未确认。这些发现支持一种两步嵌合模型，即早期的受精后 NRAS 变异奠定了背景病变的基础，而独立的次要 cn-LOH 事件产生了纯合的 NRAS 变异克隆。这为人类皮肤中斑点状模式的形成提供了分子解释。
引言 先天性黑色素细胞痣（CMN）是由发育过程中获得的受精后驱动变异引起的嵌合性黑色素细胞病变（Martins Da Silva 等人，2019）。分子研究表明，这些驱动基因最常见的是NRAS （Charbel 等人，2014；Dessars 等人，2009；Martins Da Silva 等人，2019），较少见的是BRAF 、KRAS 、APC 或 MET （Dessars 等人，2009；Martins Da Silva 等人，2019），偶尔涉及融合基因（Martin 等人，2024；Martins Da Silva 等人，2019）。这些驱动基因汇聚于异常的 RAS-丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，从而将 CMN 纳入嵌合性 RAS 病谱系（Kinsler 等人，2013；Polubothu 等人，2020）。
斑痣（NS），也称为斑点状斑痣，其特征是单个浅棕色斑疹上叠加许多较深的斑疹/丘疹，从而产生斑点状外观（Schaffer 等人，2001；Vidaurri-de la Cruz 和 Happle，2006）。最近的遗传学研究在 NS 中鉴定了受精后激活性 HRAS 变异，支持其被归类于嵌合性 RAS 病谱系（Groesser 等人，2013；Sarin 等人，2013）。
最近，一种表型相关但遗传学上独特的 CMN 亚型，称为“NS 型 CMN”（NS-CMN），已被界定。这些病变表现为大面积、通常为单个的浅棕色斑疹，包含多个深棕色至黑色斑疹/斑块，从而产生类似 NS 的斑点状临床外观（Kinsler 等人，2014；Lee 等人，2016）。NS-CMN 的叠加黑色斑疹/斑块在表型上类似经典 CMN（Krengel 等人，2016）。遗传学研究表明，两种成分共享相同的受精后激活性 NRAS 变异，包括 p.Gln61His（Kinsler 等人，2014）、p.Gln61Leu（Krengel 等人，2016）和 p.Gly13Arg（Kinsler 等人，2014），这与经典 CMN 中报道的常见 NRAS 变异（包括 p.Gln61Lys 和 p.Gln61Arg）不同。这些观察结果表明，NS-CMN 代表一种独特的 NRAS 驱动 CMN 亚型，其中两种临床成分共享共同的受精后 NRAS 驱动变异。尽管已鉴定出这些受精后驱动基因，但斑点状模式的分子基础仍未解决，特别是关于在 NS-CMN 单个背景场内产生多个叠加病变的次要遗传事件。
在本研究中，我们对 NS-CMN 的两种成分进行了整合的临床病理学和分子分析，以鉴定斑点状模式形成背后的次要遗传事件。
章节摘要 结果 背景棕色斑疹的组织病理学检查显示散在的真皮黑色素细胞，呈梭形形态，S100 和 Melan-A 阳性，伴有或不伴有表皮黑色素细胞轻度增加（图 1b）。相比之下，叠加病变显示出致密的痣细胞真皮聚集，呈小圆形至卵圆形形态，S100 和 Melan-A 阳性，细胞学非典型性轻微，表皮黑色素细胞轻度增加（图 1b）。
桑格测序显示
讨论 我们分析了三个 NS-CMN 病例中背景棕色斑疹和叠加病变的多个部位，发现背景棕色斑疹真皮中的黑色素细胞谱系细胞携带杂合致病性 NRAS 变异。相比之下，叠加病变中的真皮痣细胞经常显示出影响 1p 染色体或整个 1 号染色体的 cn-LOH，这与 NRAS 变异转化为纯合性一致。这种从杂合性开始的等位基因转移
患者 招募了三名 NS-CMN 患者（图 1a）。患者 1 为男性，NS-CMN 双侧延伸至臀部；他在 4 个月和 1 岁时进行了皮肤活检。患者 2 为女性，NS-CMN 位于下腹部，双侧延伸至下背部和大腿，并在 6 岁时进行了皮肤活检。患者 3 为女性，胸部 NS-CMN 延伸至右侧上背部和手臂；皮肤样本取自手术切除标本
伦理 本研究获得了庆应义塾大学医学院伦理委员会（批准号 20120226）、神户大学（批准号 B230011）和国立儿童健康与发展中心（批准号 926、2020-326 和 2023-027）的批准，并遵循赫尔辛基宣言进行。获得了所有参与者的书面知情同意。获得了患者监护人对发表临床图像的书面知情同意。
作者贡献 调查研究：KU、HF、SA、HS、KH、TK、KN、AK；方法学：KU、HF、SA、HH、TK、KN、AK；正式分析：HH、TK、KN、AK；可视化：KU、AY、AK；验证：AY、SA、YI；资源：YI、AK；资金获取：MA、KN、AK；撰写 - 原稿：KU、AY、AK；撰写 - 审阅和编辑：KN、AK；概念化：AK；监督：MA、AK。
人工智能/大语言模型使用声明 在准备本作品期间，作者使用了 ChatGPT-5.4 将日语文本翻译成英文。使用该工具后，作者根据需要审阅和编辑了内容，并接受对出版物内容的全部责任。
补充内容：Ueda K 等人，受精后
NRAS 变异及随后的拷贝中性杂合性缺失导致斑痣型先天性黑色素细胞痣的斑点状模式形成。
. 患者 1 的遗传分析。某例的遗传分析
未引用参考文献 Vidaurri-de la Cruz 和 Happle，2006。
致谢 我们要感谢参与本研究的人员的配合。我们还要感谢国立儿童健康与发展中心的村上弘美女士和石渡圭介博士提供的技术协助，以及庆应义塾大学医学院整形外科的大垣真理香博士在患者 3 整形手术期间提供的样本采集协助。本研究由JSPS KAKENHI （日本学会基金科学研究助成费）资助（项目编号
Kana Ueda|Ai Yoshioka|Harumi Fujita|Satomi Aoki|Hisato Suzuki|Yoshihiro Ito|Kensuke Hara|Hiroaki Hanafusa|Tomoko Kawai|Masayuki Amagai|Kazuhiko Nakabayashi|Akiharu Kubo
神户大学研究生院医学院内科相关科皮肤科学分部，日本神户 650-0017
